[發明專利]一種中小長度RNA高通量測序建庫方法及其應用在審
| 申請號： | 201911384224.6 | 申請日： | 2019-12-28 |
| 公開（公告）號： | CN110952148A | 公開（公告）日： | 2020-04-03 |
| 發明（設計）人： | 楊學敏;陳永順;張燕菲;高豐鑫 | 申請（專利權）人： | 廣州表觀生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C40B50/06 | 分類號： | C40B50/06;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 廣州獨角熊知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 44580 | 代理人： | 張小黎 |
| 地址： | 510663 廣東省廣州市黃埔區科*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 中小 長度 rna 通量 測序建庫 方法 及其 應用 | ||
1.一種中小長度RNA高通量測序建庫方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)獲取樣品中的mRNA；將所得mRNA產物、退火后結合的R2 RNA/R2RDNA雙鏈、逆轉錄酶加入緩沖液中室溫孵育，添加dNTPs后，在55-65℃下反應5-15分鐘或55-60分鐘；然后加入NaOH，95-100℃孵育3-5min，冷卻至室溫，用HCl中和；純化，獲得含cDNA第一鏈的產物；
2)將R1R DNA進行腺苷酸化反應并純化，獲得純化后的R1R DNA產物；
3)將1)所得含cDNA第一鏈的產物和2)所得R1R DNA產物加入連接體系中，連接反應后進行純化；
4)獲得的純化產物進行PCR擴增，獲得中小長度RNA高通量測序文庫。
2.如權利要求1所述的中小長度RNA高通量測序建庫方法，其特征在于，所述步驟3)中，所述連接體系為：
3.如權利要求1所述的中小長度RNA高通量測序建庫方法，其特征在于，所述步驟1)中，添加dNTPs后，在60℃下反應5-15分鐘或60分鐘。
4.如權利要求1所述的中小長度RNA高通量測序建庫方法，其特征在于，所述R2 RNA序列為5’rArGrA rUrCrG rGrArA rGrArG rCrArC rArCrG rUrCrU rGrArA rCrUrC rCrArGrUrCrA rC/3SpC3。
5.如權利要求1所述的中小長度RNA高通量測序建庫方法，其特征在于，所述R2R DNA序列為5’GTG ACT GGA GTT CAG ACG TGT GCT CTT CCG ATC TN。
6.如權利要求1所述的中小長度RNA高通量測序建庫方法，其特征在于，所述R1R DNA序列為5’/5Phos/GAT CGT CGG ACT GTA GAA CTC TGA ACG TGT AG/3SpC3。
7.如權利要求1所述的中小長度RNA高通量測序建庫方法，其特征在于，所述P5 FP引物、P7 RF引物序列為表1所示。
8.一種中小長度RNA高通量測序建庫試劑盒，其特征在于，包括表1所示的引物。
9.如權利要求8所述的中小長度RNA高通量測序建庫試劑盒，其特征在于，所述中小長度RNA高通量測序建庫試劑盒還包括如權利要求2所述的連接體系。
10.一種如權利要求1所述的中小長度RNA高通量測序建庫方法或如權利要求9所述的中小長度RNA高通量測序建庫試劑盒在中小長度RNA高通量測序中的應用。
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