[發明專利]質粒載體及其應用

有效

• 申請號: 201911382846.5
• 申請日: 2019-12-27
• 公開（公告）號: CN111118049B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 齊浩
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/55;C12N1/21;C12N15/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

1.一種質粒載體，依次包括：單鏈DNA復制起始位點、單鏈DNA復制終止位點和RepH表達盒；

所述單鏈DNA復制起始位點的序列如SEQ ID NO:1所示，所述單鏈DNA復制終止位點的序列如SEQ ID NO:3所示。

2.根據權利要求1所述的質粒載體，其特征在于，還包括SSB表達盒。

3.根據權利要求1或2所述的質粒載體，其特征在于，所述單鏈DNA復制起始位點、單鏈DNA復制終止位點之間還包括制備的目的片段。

4.根據權利要求1或2所述的質粒載體，其特征在于，依次包括：單鏈DNA復制起始位點、cas9識別位點1、cas9識別位點2、單鏈DNA復制終止位點、RepH表達盒和gRNA元件。

5.根據權利要求4所述的質粒載體，其特征在于，所述cas9識別位點1與cas9識別位點2之間還包括制備的目的片段。

6.根據權利要求4所述的質粒載體，其特征在于，所述cas9識別位點1與cas9識別位點2之間還包括基因編輯目的片段；所述基因編輯的目的片段包括靶基因的左同源臂、donor片段和右同源臂。

7.根據權利要求1～6任一項所述的質粒載體，其特征在于，還包括革蘭氏陰性菌的復制起始區。

8.根據權利要求1～7任一項所述的質粒載體，其特征在于，還包括解旋酶表達盒。

9.權利要求1～3或7～8任一項所述的質粒載體在cssDNA制備中的應用。

10.權利要求1、4～5或7～8任一項所述的質粒載體在線性ssDNA制備中的應用。

11.權利要求1、4或6～8任一項所述的質粒載體在基因編輯中的應用。

12.攜帶權利要求1～3或7～8任一項所述的質粒載體的重組宿主。

13.根據權利要求12所述的重組宿主，其特征在于，所述宿主為革蘭氏陰性菌。

14.一種cssDNA的制備方法，其特征在于，發酵攜帶權利要求1～3或7～8任一項所述的質粒載體的重組宿主，誘導RepH蛋白的表達，獲得cssDNA。

15.一種重組宿主，其攜帶Cas9表達載體，以及權利要求1、4～5或7～8任一項所述的質粒載體。

16.根據權利要求15所述的重組宿主，其特征在于，所述宿主為革蘭氏陰性菌。

17.一種ssDNA的制備方法，其特征在于，發酵攜帶Cas9表達載體以及權利要求1、4～5或7～8任一項所述的質粒載體的重組宿主，誘導RepH蛋白以及Cas9蛋白的表達，獲得ssDNA。

18.一種基因編輯方法，其特征在于，將權利要求1、4或6～8任一項所述的質粒載體轉化入攜帶含有Cas9片段和αβγ片段的質粒載體的受體細胞。

19.根據權利要求18所述的基因編輯方法，其特征在于，所述含有Cas9片段和αβγ片段的質粒載體為pRedCas9；所述受體細胞為革蘭氏陰性菌。