[發明專利]一種利用煙草水解液生產2-苯乙醇的方法

有效

• 申請號: 201911377003.6
• 申請日: 2019-12-27
• 公開（公告）號: CN113046396B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 張海波;陳國強;咸漠;張鴿;王帆;門瀟;劉麗娟;李興;王紀明;徐鎮祥
• 申請（專利權）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種利用煙草水解液生產2-苯乙醇的方法，其特征在于，將產黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)接種到含有煙草水解液的培養基中進行發酵，所得發酵液經提純后得到2-苯乙醇；所述煙草水解液為煙草廢棄物經纖維素酶、半纖維素酶、漆酶、植酸酶、木聚糖酶、中性蛋白酶、角蛋白酶和脂肪酶處理后的酶解液；所述產黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)為產黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)A4，菌種保藏編號為CGMCC No.13177；所述煙草水解液通過如下方法制備獲得：調節煙草廢棄物溶液pH為3-4，并在105℃條件下加熱10-20min；冷卻至室溫，再調節煙草廢棄物溶液pH為10-11，同樣在105℃條件下加熱10-20min，冷卻至室溫；再調節煙草廢棄物溶液pH為5.0-5.5，以煙草廢棄物質量計，添加0.2-0.3g/g的纖維素酶，0.1-0.15g/g的半纖維素酶，0.2-0.25g/g的漆酶，0.05-0.1g/g的植酸酶以及0.15-0.2g/g的木聚糖酶，放置于40-50℃，200rpm/min搖床中酶解3-4天，得到酶解液；然后調節酶解液pH為6.5-7.5，添加0.02-0.05g/g的中性蛋白酶，0.03-0.05g/g的角蛋白酶，0.04-0.05g/g的脂肪酶，放置于40-50℃，200rpm/min搖床中酶解2-3天，得到煙草水解液；

所述含有煙草水解液的培養基配方為：4.5(wt)％～6.0(wt)％煙草水解液，1.5(wt)％～2.0(wt)％生物質糖，0.1(wt)％～0.3(wt)％K₂HPO₄，0.2(wt)％～0.4(wt)％KH₂PO₄，0.04(wt)％～0.06(wt)％MgSO₄·7H₂O，余量為水，pH值為4.5-5.5。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述煙草廢棄物為碎煙葉，煙末，上部煙葉、煙花和煙草秸稈中的一種或多種的混合物。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物質糖為葡萄糖、果糖中的一種或兩種的混合物。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述發酵為30℃，180～250rpm/min的搖床中進行培養。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用煙草水解液生產2-苯乙醇的方法，步驟如下：

步驟一：產黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)的種子接種到YPD培養基中培養獲得一級種子，將獲得的一級種子接種到含有二級種子培養基的搖瓶中培養獲得二級種子；

步驟二：取步驟一獲得的二級種子液接種到含有煙草水解液的培養基中，調節pH值4.5-5.5，發酵24h后，以每升含有煙草水解液的培養基體積計，再加入5.0mL的三烷基氧化磷TRPO作為原位萃取劑，繼續發酵50-60h；

步驟三：取步驟二發酵結束的發酵液，離心后取上清，過濾后進行氣相檢測，得到2-苯乙醇。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述二級種子培養基成分包含如下：1.5(wt)％～2.5(wt)％葡萄糖,1.0(wt)％～1.5(wt)％酵母粉,2.0(wt)％～2.5(wt)％蛋白胨,0.6(wt)％～0.8(wt)％K₂HPO₄,0.05(wt)％～0.07(wt)％MgSO₄·7H₂O,1.0(wt)％～1.4(wt)％NaCl,0.07(wt)％～0.09(wt)％(NH₄)₂SO₄，余量為水，pH為7.0-7.5。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述二級種子接種到發酵培養基中是按照15(v/v)％-25(v/v)％的接種量進行的。