[發(fā)明專利]一種注射劑用透明質(zhì)酸的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911372729.0
• 申請(qǐng)日: 2019-12-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110981992B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭學(xué)平;楊桂蘭;欒貽宏;劉愛(ài)華;石艷麗;耿鳳;闞洪玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華熙生物科技股份有限公司;山東華熙海御生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): C08B37/08
• 分類號(hào): C08B37/08
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 安麗艷

1.一種注射劑用透明質(zhì)酸的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）向透明質(zhì)酸終點(diǎn)發(fā)酵液中加入乙醇進(jìn)行沉淀，靜置分層后，沉淀即為透明質(zhì)酸粗品；

（2）將透明質(zhì)酸粗品用水溶解，然后用硅藻土或珍珠巖為助濾劑過(guò)濾，收集濾液，再用乙醇沉淀，將沉淀脫水、干燥，得精制透明質(zhì)酸；

（3）將精制透明質(zhì)酸用水溶解，并將pH調(diào)至6.0-7.0，過(guò)極性大孔吸附樹(shù)脂柱，獲得流出液1；

（4）將流出液1的pH調(diào)至5.0-6.0，過(guò)非極性大孔吸附樹(shù)脂柱，獲得流出液2；

（5）將流出液2過(guò)0.2μm濾芯過(guò)濾，收集濾液，再用乙醇沉淀，將沉淀脫水、干燥，得注射劑用透明質(zhì)酸；

步驟（2）中，所述透明質(zhì)酸粗品溶解后的濃度為0.2-1.0g/L；步驟（3）中，所述精制透明質(zhì)酸的溶解濃度為0.2-1.0g/L；

步驟（3）中，所述極性大孔吸附樹(shù)脂柱包括極性樹(shù)脂柱和中極性樹(shù)脂柱；所述極性樹(shù)脂柱為XDA-8，所述中極性樹(shù)脂柱為HPD-400；

步驟（4）中，所述非極性大孔樹(shù)脂柱為D101；

步驟（3）和（4）中，過(guò)柱流速為0.1-3.0BV/h。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述透明質(zhì)酸是指其羧基結(jié)合各種陽(yáng)離子的形式。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述透明質(zhì)酸的陽(yáng)離子選自氫離子、鈉離子、鋅離子和鈣離子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）和（4）中，過(guò)柱條件為：柱溫20-50℃，流速為0.2-3.0 BV/h。

5.一種注射劑用透明質(zhì)酸的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）向透明質(zhì)酸終點(diǎn)發(fā)酵液中加入乙醇進(jìn)行沉淀，靜置分層后，沉淀即為透明質(zhì)酸粗品；

（2）將透明質(zhì)酸粗品用水溶解，然后用硅藻土或珍珠巖為助濾劑過(guò)濾，收集濾液，再用乙醇沉淀，將沉淀脫水、干燥，得精制透明質(zhì)酸；

（3）將精制透明質(zhì)酸用水溶解，并將pH調(diào)至5.0-6.0，過(guò)非極性大孔吸附樹(shù)脂柱，獲得流出液1；

（4）將流出液1的pH調(diào)至6.0-7.0，過(guò)極性大孔吸附樹(shù)脂柱，獲得流出液2；

（5）將流出液2過(guò)0.2μm濾芯過(guò)濾，收集濾液，再用乙醇沉淀，將沉淀脫水、干燥，得注射劑用透明質(zhì)酸；

步驟（2）中，所述透明質(zhì)酸粗品溶解后的濃度為0.2-1.0g/L；步驟（3）中，所述精制透明質(zhì)酸的溶解濃度為0.2-1.0g/L；

步驟（3）中，所述非極性大孔樹(shù)脂柱為D101；

步驟（4）中，所述極性大孔吸附樹(shù)脂柱包括極性樹(shù)脂柱和中極性樹(shù)脂柱；所述極性樹(shù)脂柱為XDA-8，所述中極性樹(shù)脂柱為HPD-400；

步驟（3）和（4）中，過(guò)柱流速為0.1-3.0BV/h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述發(fā)酵液和乙醇的體積比為1:1.5-2.0；步驟（2）和（5）中，所述濾液和乙醇的體積比為1:1.5-2.0。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）和（5）中沉淀脫水采用有機(jī)溶劑夾帶法。

8.一種如權(quán)利要求1-7任一制備方法獲得的透明質(zhì)酸，其特征在于，所述透明質(zhì)酸產(chǎn)品蛋白含量≤0.01 wt %，內(nèi)毒素≤0.0025EU/mg。