[發(fā)明專利]一種合成對(duì)羥基扁桃酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911367276.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN110982771B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉立明;王蕾;劉佳;宋偉;陳修來;羅秋玲;高聰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12P7/42;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種生產(chǎn)對(duì)羥基扁桃酸的重組菌，其特征在于，所述重組菌是以大腸桿菌（Escherichia coli）為宿主，雙質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)丙酮酸脫羧酶、苯乙醛脫氫酶和NADH氧化酶，所述雙質(zhì)粒為pETDuet-1質(zhì)粒和pRSFDuet-1質(zhì)粒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌，其特征在于，所述pETDuet-1質(zhì)粒用于表達(dá)苯乙醛脫氫酶、NADH氧化酶，所述pRSFDuet-1質(zhì)粒用于表達(dá)丙酮酸脫羧酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌，其特征在于，所述丙酮酸脫羧酶選自熱帶假絲酵母（Candida tropicalis），所述苯乙醛脫氫酶選自大腸桿菌（Escherichia coli）MG1655，所述NADH氧化酶選自枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）168。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的重組菌，其特征在于，所述宿主為E.coli BL21(DE3)。

5.一種轉(zhuǎn)化對(duì)羥基苯甲醛和乙醛酸生成對(duì)羥基扁桃酸的方法，其特征在于，所述方法利用權(quán)利要求1-4任一所述的重組菌將對(duì)羥基苯甲醛和乙醛酸轉(zhuǎn)化為對(duì)羥基扁桃酸，并偶聯(lián)輔酶再生系統(tǒng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述輔酶再生系統(tǒng)以NADH為底物，通過NADH氧化酶將NADH轉(zhuǎn)化為NAD⁺。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化的條件是：pH 6~8，轉(zhuǎn)化溫度為30~37℃，轉(zhuǎn)化時(shí)間20~24 h。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，所述對(duì)羥基苯甲醛的初始反應(yīng)濃度為5～30mM，對(duì)羥基苯甲醛與乙醛酸的比例為1：1~2。

9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一所述的方法，其特征在于，用所述重組菌的濕細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化；所述轉(zhuǎn)化體系中添加了Mg²⁺、TPP和NAD⁺。

10.權(quán)利要求1-4任一所述的重組菌在制藥或化工領(lǐng)域中生成對(duì)羥基扁桃酸的應(yīng)用。