[發(fā)明專利]一種檢測抗胰島素自身抗體的試紙條及其制備方法

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• 申請日: 2019-12-26
• 公開（公告）號: CN111103280A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設計）人: 李彬
• 申請（專利權）人: 河北博海生物工程開發(fā)有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N33/52
• 代理公司: 北京東巖躍揚知識產權代理事務所(普通合伙) 11559
• 代理人: 馮瓊

本發(fā)明涉及免疫檢測領域，公開了一種檢測抗胰島素自身抗體的試紙條，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的樣品墊、結合釋放墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述結合釋放墊包被含膠體金標記的抗人IgG，所述硝酸纖維素膜上設有由羊抗鼠IgG抗體包被的質控線和胰島素抗原包被的檢測線。本發(fā)明還提供了所述試紙條的制備方法。本發(fā)明所述試紙條特異性強，不與其他自身抗體發(fā)生交叉反應；靈敏度檢測結果顯示性質穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。方法簡單，操作方便，具有良好的應用前景。

技術領域

本發(fā)明涉及一種免疫檢測領域，特別是涉及一種檢測抗胰島素自身抗體的試紙條及其制備方法。

背景技術

糖尿病是由遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的常見病，臨床以高血糖為主要標志，常見癥狀有多飲、多尿、多食以及消瘦等，分為1型和2型糖尿病兩種類型。

1型糖尿病有一定的家族聚集性。有研究報告雙親有糖尿病史，其子女1型糖尿病發(fā)病率為4％～11％；兄弟姐妹間1型糖尿病的家族聚集的發(fā)病率為6％～11％；同卵雙生子1型糖尿病發(fā)生的一致性不到50％。

人類白細胞抗原(HLA)基因位于第6對染色體短臂上，為一組密切連鎖的基因群，HLA由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3類基因編碼。Ⅰ類基因區(qū)域包括HLA-A、HLA-B、HLA-C和其他一些功能未明的基因及假基因，其編碼的抗原分子存在于全部有核細胞的表面，負責遞呈外來抗原給CD8的T淋巴細胞；Ⅱ類基因區(qū)域主要包括HLA-DR、HLA-DQ和HLA-DP3個亞區(qū)，分別編碼DR、DQ和DP抗原，存在于成熟B淋巴細胞及抗原遞呈細胞表面，負責遞呈抗原給CD4細胞；Ⅲ類基因區(qū)域編碼包括某些補體成分在內的一些可溶性蛋白，如C2C4A、C4B、腫瘤壞死因子(TNF)和熱休克蛋白(HSP)等。HLA通過主要組織相溶性復合體(MHC)限制，參與T淋巴細胞識別抗原和其他免疫細胞的相互作用，以及自身耐受的形成和維持，在識別自身和異己、誘導和調節(jié)免疫反應等多個方面均具有重要作用。可見，HLA在許多自身免疫性疾病包括1型糖尿病的發(fā)生有相關性。

1型糖尿病發(fā)生常與某些感染有關或感染后隨之發(fā)生。常見的感染原有腮腺炎病毒、風疹病毒、巨細胞病毒、麻疹病毒、流感病毒、腦炎病毒、脊髓灰質炎病毒、柯薩奇病毒及Epstein-Barr病毒等。

已明確1型糖尿病由免疫介導的胰島β細胞破壞所致，現(xiàn)已證實在1型糖尿病的發(fā)生發(fā)展過程中，可檢測到多種針對胰島β細胞的自身抗體(IAA)。在已確診的1型糖尿病患者中，胰島素自身抗體IAA的陽性率約為50％。胰島素自身抗體對糖尿病的診斷、鑒別診斷及治療具有非常重要的意義。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于，提供一種檢測抗胰島素自身抗體的試紙條，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的樣品墊、結合釋放墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述結合釋放墊包被含膠體金標記的抗人IgG，所述硝酸纖維素膜上設有由所述抗人IgG的第二抗體包被的質控線和胰島素抗原包被的檢測線。

作為優(yōu)選，所述抗人IgG為鼠源。更優(yōu)選的，所述抗人IgG的二抗為羊抗鼠二抗。

本發(fā)明應用抗原抗體反應及免疫層析一步法原理，即血清中抗胰島素自身抗體(Human insulin autoantibodies，簡稱IAA)與檢測試劑中膠體金標記的抗人IgG結合，再與硝酸纖維素膜上固定的胰島素抗原結合，從而沉積下來形成檢測色帶，根據(jù)試紙中段檢測線(Test-line簡稱T線)及其上方表示試紙有效的質控線(Control-line，簡稱C線)處有無色帶顯示，作為胰島素依賴型糖尿病(1型糖尿病)輔助診斷的快速檢測試紙。

本發(fā)明還提供了包含所述試紙條的檢測抗胰島素自身抗體的試劑盒。

本發(fā)明還提供所述試紙條的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備膠體金溶液；