[發明專利]miR-376b的應用及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201911360258.1
• 申請日: 2019-12-25
• 公開（公告）號: CN110878353B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 董政;劉志文;唐程遠;高婧麗
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅二醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明公開了miR?376b的應用及檢測試劑盒。具體涉及檢測miR?376b的試劑在制備預測患有膿毒血癥的人或鼠中急性腎損傷制劑中的應用。在膿毒血癥急性腎損傷患者中，尿miR?376b表達下調，血肌酐值或尿素氮值與尿miR?376b表達均存在負相關性。提示miR?376b表達下調可能與膿毒血癥患者的急性腎損傷相關。本發明結果表明，miR?376b可作為膿毒血癥AKI診斷的生物標記物，具有早期診斷的優勢和較高的敏感性及特異性。

技術領域

本發明屬于膿毒血癥患者急性腎損傷檢測技術領域，具體涉及一種檢測miR-376b的試劑在制備預測膿毒血癥患者急性腎損傷制劑中的應用，以及檢測試劑盒。

背景技術

急性腎損傷(acute?kidney?injury，AKI)，亦稱急性腎衰竭，是由多種原因引起的腎臟功能快速下降甚至喪失，導致機體不能及時將體內各種毒素和代謝產物排泄出去，進而使得各種有害物質或者體內的正常代謝產物在體內蓄積，引起機體內環境的紊亂和代謝異常，并出現全身各個系統的癥狀。在臨床上，AKI主要由膿毒血癥，缺血再灌注(IR)損傷和各種內源性以及外源性腎毒素物質引起。其中，膿毒血癥占所有AKI病例的近一半。此外，據統計，膿毒血癥的發病率也在不斷上升。根據一項針對美國人群的回顧性分析，在22年間，膿毒血癥診斷的年增長率為8.7％。腎臟對膿毒血癥損傷極其敏感，而且膿毒血癥AKI的死亡率高達70％，是膿毒血癥致死的重要獨立危險因素。但目前對膿毒血癥AKI的發病機制的了解十分有限，臨床上早期診斷困難。因此，找到一個能夠早期診斷發現膿毒血癥患者AKI的指標，具有重要的意義。

根據KDIGO指南，血清肌酐和尿量是AKI診斷和分期的金標準.然而，這兩個指標也有很大的局限性。主要表現為血清肌酐和尿量易受多種因素的影響，如有效循環血容易不足或利尿劑的使用。因此，近年來，一些新型蛋白標志物也被應用于AKI的診斷，包括腎損傷分子-1(KIM-1)，中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)，金屬蛋白酶組織抑制因子2(TIMP2)，胰島素樣生長因子結合蛋白7(IGFBP7)和胱抑素C。但是，在膿毒血癥AKI的診斷中，這些指標仍然具有很大的局限性。如在沒有AKI的情況下，膿毒血癥本身也會引起NGAL的上調，診斷缺乏特異性。關鍵的是，膿毒血癥AKI小管損傷輕微，這些蛋白質指標在尿液中并不會出現明顯的上調。

MicroRNAs(miRNAs)是一類由21-25個核苷酸組成的小分子非編碼RNAs，它們能夠在細胞內調控相應靶基因的表達。通過定量檢測血液和尿液中的microRNAs分子表達量，可協助診斷AKI，并實時監測病情的發展和轉歸。與傳統生化指標相比，miRNAs在生物體液中非常穩定，不易降解，容易分析和量化。同時關鍵的是，基于Taqman的miRNAs檢測是高度特異性的，因為它以堿基互補配對為原則，是基于核酸序列的。這些優點提示我們可以使用miRNAs作為AKI的診斷和判斷疾病預后的分子指標。同時，基于PCR的擴增能夠在少量體液中測量非常少量的miRNA，具有高度的診斷敏感性。這些優點提示我們可以使用miRNAs作為膿毒血癥AKI的診斷和判斷疾病預后的分子指標。

發明內容

本發明的第一個目的是提供miR-376b的應用，具體是檢測miR-376b的試劑在制備預測患有膿毒血癥的人或鼠中急性腎損傷制劑中的應用。該試劑用于預測或者診斷患有膿毒血癥的人或鼠患急性腎損傷的風險。

上述的miR-376b序列分為人源性：aucauagaggaaaauccauguu或者鼠源性：aucauagaggaacauccacuu。

上述檢測人源性miR-376b的試劑用于制備預測患有膿毒血癥的人中急性腎損傷制劑。

上述檢測鼠源性miR-376b的試劑用于制備預測患有膿毒血癥的鼠中急性腎損傷制劑。

本發明基于首次發現miR-376b與膿毒血癥患者中的急性腎損傷的關聯性，進而獲得miR-376b在膿毒血癥患者急性腎損傷的相關檢測產品制備中的新應用。對早期診斷、預測膿毒血癥并急性腎損傷有重要意義。