[發明專利]禽流感病毒TJ株、禽流感滅活疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 201911358729.5
• 申請日: 2019-12-25
• 公開（公告）號: CN110951698A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 孫德君;柴華;楊末;竇海艷;馮艷男;方超;孫曉峰;李倩;李春雪;李琳
• 申請（專利權）人: 哈藥集團生物疫苗有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/06;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

本發明公開了禽流感病毒TJ株、禽流感滅活疫苗及其制備方法。本發明從來自天津市郊某養殖場分離得到一株禽流感病毒TJ株，其微生物保藏編號是CGMCC NO.14323。本發明所提供的病毒分離株TJ株與現有的JY株和HZ株HA、NA氨基酸序列存在一定的差異，在HI抗體滴度上，本發明分離的禽流感病毒TJ株比現有的HZ株高出4個滴度，比現有的JY株與高出3個滴度。本發明進一步應用所述禽流感病毒TJ株制備得到禽流感滅活疫苗。滅活疫苗的效力檢驗結果為兩組免疫組雞HI抗體效價幾何平均值分別為7.5log2和8.2log2，滅活疫苗的免疫保護效力評估試驗結果表明滅活疫苗對禽流感病毒的攻擊能夠提供良好的保護。

技術領域

本發明涉及禽流感病毒分離株，本發明進一步涉及禽流感病毒TJ株以及由其制備的禽流感滅活疫苗，屬于禽流感病毒株及其應用領域。

背景技術

禽流感(Avian Influenza.AI)是由禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)引起的能夠誘發家禽、野鳥和部分哺乳動物發病的一種傳染病。禽流感病毒屬于正黏病毒科A型流感病毒屬。禽流感病毒具有眾多血清型，因此不同的禽流感病毒毒株間存在很大的毒力差異，給臨床防控和診斷帶來很大的困難。H9N2疫苗技術成熟，能夠有效抑制H9流感的爆發，但近年來中國亞型禽流感病毒傳播速度快，能夠感染多種不同宿主，不同毒株的血清學眾多，不同毒株間毒力差異大，基因變異性強。并且H9N2亞型禽流感病毒的部分毒株能夠突變為高致病性毒株，部分基因可以突變為哺乳動物受體，因此防治困難。

中國的H9部分地區的雞場H9免疫失敗，出現了非典型性H9N2禽流感的爆發。通過疫苗免疫接種防控低致病力的禽流感仍然是目前采用的主要手段。現有疫苗已經不能產生完全免疫保護。

發明內容

本發明的目的之一是提供一株禽流感病毒TJ株；

本發明的目的之二是提供由所述禽流感病毒TJ株制備的禽流感滅活疫苗；

本發明的目的之三是提供一種制備所述禽流感滅活疫苗的方法。

本發明的上述目的是通過以下技術方案來實現的：

本發明從來自天津市郊某養殖場，采集瀕死雞的肝臟及脾臟從中分離得到一株禽流感病毒TJ株。本發明所分離的禽病毒TJ株的紅細胞凝集試驗呈陽性；分離病毒能被禽流感H9亞型陽性血清所抑制；不能被EDS76陽性血清、新城疫陽性血清所抑制。病毒分離株TJ株與JY株和HZ株HA、NA基因氨基酸序列對比結果發現，與現有的JY株和HZ株HA、NA氨基酸序列存在一定的差異。在HI抗體滴度上，本發明分離的禽流感病毒TJ株比現有的HZ株高4個滴度，比現有的JY株與高3個滴度。

本發明將分離的禽流感病毒TJ株已于2017年7月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC No.14323，分類命名：禽流感病毒H9亞型。

本發明進一步提供了一種應用所分離的禽流感病毒TJ株制備禽流感滅活疫苗的方法，包括：

(1)將權利要求1所述的禽流感病毒TJ株進行病毒增殖；(2)將增殖后的病毒滅活；(3)將疫苗佐劑混合在一起加熱溶解得到油相；(4)向滅活后的病毒液中加入吐溫-80使吐溫-80溶解得到水相；(5)將水相與油相混合攪拌、乳化，即得。

作為本發明一種優選的實施方式，步驟(3)中將白油，司本-80和硬脂酸鋁按照94:6:1.5的質量比例混合在一起加熱溶解得到油相；進一步優選的，將熔解后的混合物在115℃滅菌40分鐘，冷至室溫備用。

作為本發明一種優選的實施方式，步驟(4)中每96ml病毒液加入4ml吐溫-80。