[發明專利]人源化細胞因子IL15基因改造非人動物的構建方法及應用

有效

• 申請號: 201911358251.6
• 申請日: 2019-12-25
• 公開（公告）號: CN111304248B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 沈月雷;張美玲;姚佳維;郭朝設;郭雅南;白陽;黃蕤;趙磊
• 申請（專利權）人: 百奧賽圖江蘇基因生物技術有限公司;百奧賽圖（北京）醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/90;C12N9/22;C12N15/24;C12N15/62;C12N5/10;C12N15/113;A01K67/027
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 張丹;徐丹丹

1.一種人源化IL15基因改造非人動物的構建方法，其特征在于，所述的構建方法包含用sgRNA分子和靶向載體將編碼人IL15蛋白的核苷酸序列導入非人動物IL15基因的內源調控元件之后，所述的人源化IL15基因改造非人動物體內表達人IL15蛋白；所述的sgRNA分子靶向5’端的靶位點序列如SEQ ID NO：10所示，靶向3’端的靶位點序列SEQ ID NO：21所示；所述的靶向載體包含供體DNA序列，所述的供體DNA序列如SEQ ID NO：9所示，所述的靶向載體還包含與待改變的轉換區5’端同源的DNA片段，即5’臂，所述5’臂核苷酸序列如SEQ IDNO：7所示，和，所述的靶向載體還包含與待改變的轉換區3’端同源的DNA片段，即3’臂，所述3’臂核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述的人源化IL15基因包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸片段；所述的非人動物是NOD-Prkdc^scid IL-2rg^null小鼠。

2.一種制備多基因修飾的人源化非人動物的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a)按照權利要求1所述的構建方法構建的非人動物；

b)將步驟(a)制備獲得的非人動物與其他基因人源化動物交配、體外授精或直接進行基因編輯，并進行篩選，得到多基因修飾的人源化非人動物。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的其他基因人源化動物選自基因IL3、IL6、CSF1、CSF2或SIPRA經修飾的人源化動物。

4.一種荷瘤動物模型的制備方法，其特征在于，所述的動物模型制備方法包括通過權利要求1-3任一所述的方法制備的非人動物。

5.來源于權利要求1所述的構建方法構建的人源化IL15基因改造非人動物、權利要求2-3任一所述的方法獲得的多基因修飾的人源化非人動物、權利要求4所述制備方法制備的荷瘤動物模型在需要涉及人類細胞的免疫過程的產品開發，制造人類抗體，或者作為藥理學、免疫學、微生物學和醫學基礎研究的模型系統中的應用；或者，在生產和利用動物實驗疾病模型，用于病原學研究中的應用；或者，在篩選、驗證、評價或研究IL15基因功能、針對IL15靶位點的藥物、人造血干細胞的形成、功能研究和/或構建疾病模型藥效研究，免疫相關疾病藥物以及抗腫瘤藥物方面的應用，所述應用不是疾病的診斷或治療方法。