[發(fā)明專利]一種靶向NKG2D配體和CD19的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體及其表達(dá)載體和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911352437.0
• 申請(qǐng)日: 2019-12-25
• 公開（公告）號(hào): CN110981970B
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張坤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華夏源（上海）細(xì)胞基因工程股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 武漢尚齊知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42261
• 代理人: 胡艷

1.一種靶向NKG2D配體和CD19的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體，其特征在于，所述雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體包括：依次連接的信號(hào)肽、靶向NKG2D配體的NKG2D胞外區(qū)、連接片段、靶向CD19的單鏈抗體、加長(zhǎng)的CD8α鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)、共刺激因子和胞內(nèi)信號(hào)肽，所述信號(hào)肽的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，所述靶向NKG2D配體的NKG2D胞外區(qū)的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示，所述靶向CD19的單鏈抗體的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：3所示，所述加長(zhǎng)的CD8α鉸鏈區(qū)的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：4所示，所述跨膜區(qū)的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，所述胞內(nèi)信號(hào)肽的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：6所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體，其特征在于，所述共刺激因子包括：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、ICOS、NKG2D和B7-H3中的至少一種。

3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體，其特征在于，所述共刺激因子為4-1BB，且所述共刺激因子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：7所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體，其特征在于，所述連接片段為(G4S)n或(EAAAK)n，n為1、2或3。

5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體，其特征在于，所述連接片段為(G4S)n，n為1，所述連接序列的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：8所示。

6.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體包括載體和如權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的雙靶點(diǎn)嵌合體抗原受體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的表達(dá)載體，其特征在于，所述載體為慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、電轉(zhuǎn)導(dǎo)載體或睡美人轉(zhuǎn)座子載體。

8.一種如權(quán)利要求6或7所述的表達(dá)載體在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：將所述表達(dá)載體作為抗B細(xì)胞系惡性血液腫瘤的藥物。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗B細(xì)胞系惡性血液腫瘤包括：非霍奇金淋巴瘤、B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病、B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤。