[發(fā)明專利]一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜及其制備方法

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• 申請日: 2019-12-24
• 公開（公告）號: CN110934815A
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設計）人: 李慧芳;王悅朋;孫爽
• 申請（專利權）人: 盛世榮恩生物科技有限公司
• 主分類號: A61K8/99
• 分類號: A61K8/99;A61K8/34;A61K8/44;A61K8/49;A61K8/64;A61K8/73;A61K8/9728;A61K8/9789;A61K8/98;A61Q19/00;A61Q19/08
• 代理公司: 上海海貝律師事務所 31301
• 代理人: 范海燕

1.一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)制取間充質干細胞培養(yǎng)上清液：使用粘連蛋白對細胞培養(yǎng)容器進行預處理，預處理后將粘連蛋白吸走，然后將馴化后的P1-P30代間充質干細胞在培養(yǎng)容器進行鋪板且在第二天換液，第三天開始收取培養(yǎng)上清，過0.22μm濾膜后備用；

(2)制備基底液：將包括按質量比計的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％雙丙甘醇、0.5-5％雙甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA鈉、0.01-1％PEG-60氫化蓖麻油、0.1-0.3％黃原膠和余量水的A組分經(jīng)高速混合器加熱到80-85℃，進行高速混合攪拌,高速混合器冷卻到40℃以下時投入包括按質量比計的0.1-0.5％檸檬酸、0.1-0.5％檸檬酸鈉和余量水的B組分高速混合攪拌，然后投入包括按質量比計的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜堿、0.1-1％羥乙基纖維素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜蘆醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％積雪草提取物、0.01-1％水解蠶絲、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水的C組分進行高速混合攪拌；

(3)待高速混合器冷卻到室溫后，在步驟(2)的基底液中加入步驟(1)中的間充質干細胞培養(yǎng)上清液，進行高速混合攪拌。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜制備方法，其特征在于：所述間充質干細胞的馴化方法為以無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜制備方法，其特征在于：所述含有間充質干細胞的組織來源于健康者的臍帶、胎盤、脂肪、骨髓或牙髓。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜制備方法，其特征在于：所述含有間充質干細胞的提取方法為用磷酸鹽緩沖液洗去血細胞后，剪碎成大約1mm³的細小組織塊后，加入2mL的1mg/mL的I型膠原酶消化液處理后，轉移至15mL離心管中，37℃恒溫搖床振蕩消化30min，沒有大的組織塊后，加入等體積間充質干細胞完全培養(yǎng)基終止消化，1000rpm離心8min沉降細胞，棄去上清液及懸浮脂肪組織，加入脂肪間充質干細胞完全培養(yǎng)基，接種于細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃的CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48小時后首次換液，培養(yǎng)4-7天后，更換新的完全培養(yǎng)基再培養(yǎng)2-3天，達到80-90％融合時，棄掉培養(yǎng)液，先用磷酸鹽緩沖液洗滌細胞三次，然后加入無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)48小時，進行傳代培養(yǎng)，即得可用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的間充質干細胞。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜制備方法，其特征在于：所述磷酸鹽緩沖液的pH值為7.0-7.2。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜制備方法，其特征在于：所述在培養(yǎng)容器進行鋪板的間充質干細胞的密度大于1.8×10⁴/cm²。

7.根據(jù)權利要求1所述的一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜制備方法，其特征在于：所述使用粘連蛋白進行預處理的條件為在37℃處理1小時。

8.根據(jù)權利要求1所述的一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜制備方法，其特征在于：所述粘連蛋白采用iMatrix-511粘連蛋白。

9.一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜，其特征在于其面膜液包括：由按質量比計的0.1-5％間充質干細胞培養(yǎng)上清液和95-99.9％的基底液組成。

10.根據(jù)權利要求7所述的一種含有間充質干細胞培養(yǎng)上清液的抗糖化面膜，其特征在于：所述基底液包括A組分、B組分、C組分：

所述A組分包括按質量百分比計的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％雙丙甘醇、0.5-5％雙甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA鈉、0.01-1％PEG-60氫化蓖麻油、0.1-0.3％黃原膠和余量水；

所述B組分包括按質量百分比計的0.1-0.5％檸檬酸、0.1-0.5％檸檬酸鈉和余量水；

所述C組分包括按質量百分比計的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜堿、0.1-1％羥乙基纖維素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜蘆醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％積雪草提取物、0.01-1％水解蠶絲、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水。