[發明專利]一種檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎病毒的引物組合物、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201911342574.6
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN110878381A
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發明（設計）人: 謝芝勛;范晴;謝志勤;謝麗基;熊文婕;黃嬌玲;張艷芳;曾婷婷;王盛;羅思思;鄧顯文;劉加波
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/35;C12R1/93
• 代理公司: 北京國謙專利代理事務所(普通合伙) 11752
• 代理人: 肖應國

1.一種檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的引物組合物，其特征在于，所述引物組合物包括2組特異性引物和探針，其中第一組特異性引物和探針包括MB-F3，MB-B3，MB-FIP，MB-BIP，以及MB-probe，第二組特異性引物和探針包括IBRV-F3，IBRV-B3，IBRV-FIP，IBRV-BIP，以及IBRV-probe，所述第一組和第二組特異性引物和探針依次為序列表中SEQ IDNo.1至SEQ ID No.10所示核苷酸序列，或為將所述序列表中SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示的核苷酸序列經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與所述序列表中所示的核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；所述MB-probe的5’端標記CY 5.5熒光基團，3’端標記BHQ3淬滅基團，該CY 5.5熒光基團在694nm波長下呈大紅色；所述IBRV-probe的5’端標記FITC熒光基團，3’端標記BHQ1淬滅基團，該FITC熒光基團在520nm波長下呈黃綠色。

2.一種檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括權利要求1所述的引物組合物。

3.根據權利要求2所述的檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括Bst DNA 3.0聚合酶。

4.根據權利要求2或3所述的檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的每25ul反應體系中包括1μL DNA模板，10×緩沖液2.5μL，15U Bst DNA3.0聚合酶，MB-FIP、MB-BIP、IBRV-FIP、IBRV-BIP各40pmol,MB-F3、MB-B3、IBRV-B3、IBRV-F3各5pmol，MB-probe、IBRV-probe各0.1μM，加雙蒸水補足至25μL。

5.一種檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的方法，其特征在于，采用權利要求1-4任一項所述的引物組合物或試劑盒進行環介導等溫擴增反應。

6.根據權利要求5所述的檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的方法，其特征在于，所述環介導等溫擴增反應的反應過程包括60-70℃反應60分鐘，80℃作用5min終止反應。

7.根據權利要求6所述的檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的方法，其特征在于，所述環介導等溫擴增反應的反應過程包括60℃反應60分鐘，80℃作用5min終止反應。

8.權利要求1所述的檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的引物組合物、權利要求2-4任一項所述的檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的試劑盒、權利要求5-7任一項所述的檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎的方法在同時檢測牛支原體和牛傳染性鼻氣管炎中的應用。