[發明專利]一種提高環糊精葡萄糖基轉移酶分泌表達的優化方法及其應用

有效

• 申請號: 201911341391.2
• 申請日: 2019-12-24
• 公開（公告）號: CN113025590B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 李夢嬌;石艷麗;溫朝;王冠鳳;郭學平
• 申請（專利權）人: 華熙生物科技股份有限公司;山東華熙海御生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12P19/18;C12P19/44
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 賈波

1.一種提高環糊精葡萄糖基轉移酶分泌表達的優化方法，其特征是：環糊精葡萄糖基轉移酶在大腸桿菌中進行異源表達的發酵過程中，向發酵培養基中添加甘氨酸、Ca²⁺、β-環糊精、牛磺酸和乳糖；β-環糊精和牛磺酸在發酵開始時加入，甘氨酸、Ca²⁺和乳糖在發酵至OD₆₀₀為0.4-0.6時加入。

2.根據權利要求1所述的優化方法，其特征是：所述大腸桿菌為含編碼環糊精葡萄糖基轉移酶基因的重組大腸桿菌。

3.根據權利要求1或2所述的優化方法，其特征是：甘氨酸在發酵體系中的濃度為100mmol/L-300 mmol/L。

4.根據權利要求3所述的優化方法，其特征是：甘氨酸在發酵體系中的濃度為200mmol/L。

5.根據權利要求1或2所述的優化方法，其特征是：Ca²⁺在發酵體系中的濃度為5 mmol/L-15 mmol/L。

6.根據權利要求5所述的優化方法，其特征是：Ca²⁺在發酵體系中的濃度為10 mmol/L。

7.根據權利要求1或2所述的優化方法，其特征是：β-環糊精在發酵體系中的濃度為5mmol/L -20 mmol/L。

8.根據根據權利要求7所述的優化方法，其特征是：β-環糊精在發酵體系中的濃度為5mmol/L -10 mmol/L。

9.根據權利要求8所述的優化方法，其特征是：β-環糊精在發酵體系中的濃度為10mmol/L。

10.根據權利要求1或2所述的優化方法，其特征是：牛磺酸在發酵體系中的濃度為0. 8mmol/L -1.1 mmol/L。

11.根據權利要求10所述的優化方法，其特征是：牛磺酸在發酵體系中的濃度為1mmol/L。

12.根據權利要求1或2所述的優化方法，其特征是：乳糖在發酵體系中的濃度為5mmol/L -30 mmol/L。

13.根據權利要求12所述的優化方法，其特征是：乳糖在發酵體系中的濃度為15 mmol/L。

14.根據權利要求1或2所述的優化方法，其特征是：所述發酵培養基為TB培養基，成分包括：胰蛋白胨10-15g/L、酵母粉20-25 g/L、甘油3-6 g/L、KH₂PO₄ 2-5 g/L、K₂HPO₄.3H₂O15-20 g/L。

15.根據權利要求1或2所述的優化方法，其特征是：發酵培養的溫度為22-28℃，攪拌速度為180-220 rpm。

16.一種生產維生素C葡萄糖苷的方法，其特征是：包括制備環糊精葡萄糖基轉移酶的步驟，所述環糊精葡萄糖基轉移酶采用權利要求1-14中任一項所述的提高環糊精葡萄糖基轉移酶分泌表達的優化方法制得。