[發(fā)明專利]一種基于穿刺負(fù)壓輔助的卵母細(xì)胞壓電超聲破膜方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911338474.6
• 申請(qǐng)日: 2019-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN110904091B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃海波;閆肅;朱易辰;陳立國(guó);劉文齊;顧鳴偉;馬友文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N13/00
• 分類號(hào): C12N13/00;C12N5/075
• 代理公司: 蘇州見山知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32421
• 代理人: 胡益萍

本發(fā)明公開了一種基于穿刺負(fù)壓輔助的卵母細(xì)胞壓電超聲破膜方法，包括以下步驟：(1)在顯微鏡下找到卵母細(xì)胞，接著通過吸持針固定住卵母細(xì)胞外圍的透明帶；(2)調(diào)節(jié)卵母細(xì)胞的位置，移動(dòng)穿刺針，使穿刺針的針尖與透明帶之間的距離為2?4μm；(3)開啟穿刺負(fù)壓，對(duì)透明帶進(jìn)行吸附；(4)開啟超聲激勵(lì)，并控制穿刺針進(jìn)行微量的進(jìn)給；(5)保持穿刺負(fù)壓，并控制穿刺針連續(xù)進(jìn)給；(6)刺穿透明帶和卵母細(xì)胞的細(xì)胞膜；(7)關(guān)閉穿刺針的負(fù)壓，穿刺針刺穿卵質(zhì)膜；(8)控制穿刺針退出；(9)穿刺結(jié)束。本發(fā)明能夠更好的穩(wěn)定卵母細(xì)胞，提高了穿刺精度，實(shí)現(xiàn)了微創(chuàng)化破膜，既能夠保證卵母細(xì)胞破膜的成功率，又能達(dá)到較高的卵母細(xì)胞存活率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種卵母細(xì)胞破膜方法，尤其涉及一種基于穿刺負(fù)壓輔助的卵母細(xì)胞壓電超聲破膜方法。

背景技術(shù)

卵母細(xì)胞作為生命延續(xù)過程中最重要的細(xì)胞之一，在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)的研究中，針對(duì)卵母細(xì)胞的顯微技術(shù)一直占據(jù)著最重要的位置。其中細(xì)胞的破膜技術(shù)更是應(yīng)用廣泛，例如轉(zhuǎn)基因注射技術(shù)、人工輔助生殖技術(shù)，克隆技術(shù)等。但是由于生命孕育過程中的自我保護(hù)，卵母細(xì)胞的外圍被一層厚厚的透明帶所包裹，因此想要對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行顯微操作，必須將透明帶刺穿。由于卵母細(xì)胞是一個(gè)粘彈性體，因此想要在細(xì)胞無變形的情況下，通過物理接觸的方式成功地穿刺卵母細(xì)胞透明帶幾乎是不可能的。

為了解決這項(xiàng)技術(shù)問題，一種基于壓電的超聲顯微破膜技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，隨著時(shí)間的發(fā)展，該項(xiàng)技術(shù)也愈發(fā)成熟，成為了時(shí)下較為主流和應(yīng)用最廣的超聲破膜方式。但是，基于壓電超聲的顯微注射方式在操作的過程中，先通過吸持針對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行一定的擠壓預(yù)緊，尤其是對(duì)當(dāng)前用于生物實(shí)驗(yàn)最廣的小鼠卵母細(xì)胞，在使用該方法的時(shí)候，需要很大的擠壓預(yù)緊才能夠完成破膜，這樣直接會(huì)導(dǎo)致卵母細(xì)胞產(chǎn)生較大的變形，破壞細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，降低了被操作細(xì)胞的存活率。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足，本發(fā)明的目的在于提供一種基于穿刺負(fù)壓輔助的卵母細(xì)胞壓電超聲破膜方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一實(shí)施例提供的技術(shù)方案如下：一種基于穿刺負(fù)壓輔助的卵母細(xì)胞壓電超聲破膜方法，包括以下步驟：

(1)在顯微鏡下找到卵母細(xì)胞，接著通過吸持針固定住卵母細(xì)胞外圍的透明帶；

(2)調(diào)節(jié)卵母細(xì)胞的位置，移動(dòng)穿刺針，使穿刺針的針尖與透明帶之間的距離為2-4μm；

(3)開啟穿刺負(fù)壓，對(duì)透明帶進(jìn)行吸附；

(4)開啟超聲激勵(lì)，并控制穿刺針進(jìn)行微量的進(jìn)給；

(5)保持穿刺負(fù)壓，并控制穿刺針連續(xù)進(jìn)給；

(6)刺穿透明帶和卵母細(xì)胞的細(xì)胞膜；

(7)關(guān)閉穿刺針的負(fù)壓，穿刺針刺穿卵質(zhì)膜；

(8)控制穿刺針退出；

(9)穿刺結(jié)束。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟(1)中，在顯微鏡的視野下找到卵母細(xì)胞所在的位置，并通過手動(dòng)顯微調(diào)節(jié)平臺(tái)將卵母細(xì)胞調(diào)到視野的中央。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟(1)中，移動(dòng)吸持針，利用吸持針內(nèi)的負(fù)壓對(duì)透明帶進(jìn)行吸持固定。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟(2)中，移動(dòng)穿刺針調(diào)節(jié)卵母細(xì)胞的位置。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，通過控制機(jī)械臂移動(dòng)穿刺針。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟(2)中，穿刺針的針尖與透明帶之間的距離為3μm。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟(3)中，開啟與穿刺針相連通的真空泵實(shí)現(xiàn)穿刺負(fù)壓，對(duì)透明帶進(jìn)行吸附。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟(4)中，在進(jìn)給的過程中保持穿刺針處于負(fù)壓狀態(tài)。