[發(fā)明專利]一種固液相結(jié)合制備布美諾肽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911337614.8
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN110903353B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳豐;張萌;金晶;陳輝;顧海東
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州科技大學(xué)
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

本發(fā)明公開了一種固液相結(jié)合制備布美諾肽的方法。本發(fā)明制備布美諾肽的方法，通過液相法合成AC?Nle?Asp?O?2?Phipr二肽片段，在Lys的主鏈和側(cè)鏈分別進(jìn)行偶聯(lián)延長肽序，得到Fmoc?His(Boc)?D?Phe?Arg(pbf)?Trp(Boc)?Lys(AC?Nle?Asp?O?2?Phipr)?王樹脂，切除保護基后主鏈和側(cè)鏈進(jìn)行環(huán)化，避免了首尾折疊成環(huán)，解決了折疊成環(huán)位阻大的問題，并且由于成環(huán)位點更接近，已成環(huán)的肽對未成環(huán)的肽的影響也降低至最小。并且本發(fā)明不采用堿進(jìn)行水解，不會產(chǎn)生相應(yīng)的雜質(zhì)。本發(fā)明布美諾肽的合成方法合成布美諾肽純度高、成本低，適合規(guī)模化生產(chǎn)的布美諾肽。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種固液相結(jié)合制備布美諾肽的方法，屬于多肽合成技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

布美諾肽，英文名Bremelanotide，最初由亞利桑那大學(xué)研究開發(fā)，作用靶點為MC3R/MC4R，結(jié)構(gòu)屬于肽類似物，用于治療絕經(jīng)前女性性欲障礙；Paladin公司于2007年獲得該化合物的研發(fā)權(quán)利，隨后進(jìn)入開發(fā)，臨床研究集中于北美；2018年3月向美國FDA提交了NDA申請，2019年6月21獲FDA批準(zhǔn)上市。布美諾肽由7個氨基酸組成，與α-促黑素細(xì)胞激素具有相同的核心序列，后者的受體在食欲及性欲喚起中起重要作用。其肽序為AC-Nle-[Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys]cycle-OH，結(jié)構(gòu)式如下：

布美諾肽是由7個氨基酸組成的環(huán)肽，其合成的技術(shù)難點在于成環(huán)。目前布美諾肽的合成技術(shù)根據(jù)成環(huán)方法可分為兩類，一類是液相中成環(huán)，一類是樹脂上成環(huán)。在液相中成環(huán)容易產(chǎn)生大量分子間偶聯(lián)產(chǎn)物，生成二肽，三肽等副反應(yīng)，影響收率；為了抑制副反應(yīng)的生成，必須降低反應(yīng)濃度，會產(chǎn)生大量的廢水，不利于環(huán)保；并且操作比較麻煩。因此，固相成環(huán)方法的研究更值得探索。

目前，布美諾肽的合成方法主要為固相合成法。固相成環(huán)主要是偶聯(lián)完主鏈后脫去保護，肽鏈?zhǔn)孜蚕噙B，但是肽鏈因空間位阻太大，難以折疊至首尾相連，因而導(dǎo)致效率不高，導(dǎo)致空間位阻大的主要原因包括以下兩個方面：(1)肽鏈上的各種保護基結(jié)構(gòu)，使得肽鏈具有剛性結(jié)構(gòu)，難以折疊回來成環(huán)；(2)成環(huán)以后，環(huán)肽在樹脂上具有了更大的空間結(jié)構(gòu)，使得未成環(huán)的肽難以折疊回來成環(huán)。專利CN200610086841.4采用逐步合成的方法，肽樹脂合成結(jié)束后，選擇性脫除Asp及Lys的保護基，之后在樹脂上成環(huán)，最后以HF裂解，因為HF的劇烈腐蝕性而導(dǎo)致該方法無法大規(guī)模使用，其實施例公布的精肽收率為30～35％；專利CN200710048824.6同樣采用選擇性脫保護的方法，但其所選擇的的脫保護方法在脫除Asp及Lys側(cè)鏈保護基的同時也會脫除His的保護基Trt，其實施例公布的粗肽收率為80％；專利CN200910131598.7布美諾肽的固相合成方法中將對羥基苯甲酸連接在RinkAmideResin之后，再采用普通氨基酸原料逐步合成，合成結(jié)束后以TFA裂解，在液相條件下成環(huán)，但是在進(jìn)行液相成環(huán)時容易發(fā)生分子間偶聯(lián)，產(chǎn)生二聚體，三聚體等多聚物，嚴(yán)重降低合成收率；專利201610070195.6中將HO-(CH2)n-COOH作為連接固相載體與目標(biāo)肽的linker，在樹脂上成環(huán)，該方法改造了樹脂的linker結(jié)構(gòu)，在羧基端引入長鏈脂鍵，克服了空間位阻大的第二個原因，但是難以折疊成環(huán)的問題并沒有太好的作用，并且在切除脂鍵的過程中用到了堿性溶液，溶液產(chǎn)生各種降解雜質(zhì)，影響收率和純度。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種固液相結(jié)合制備布美諾肽的方法，通過液相法合成AC-Nle-Asp-O-2-Phipr二肽片段，在Lys的主鏈和側(cè)鏈分別進(jìn)行偶聯(lián)延長肽序，得到Fmoc-His(Boc)-D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(AC-Nle-Asp-O-2-Phipr)-王樹脂，切除保護基后主鏈和側(cè)鏈進(jìn)行環(huán)化，避免了首尾折疊成環(huán)，解決了折疊成環(huán)位阻大的問題，并且由于成環(huán)位點更接近，已成環(huán)的肽對未成環(huán)的肽的影響也降低至最小。

本發(fā)明的第一個目的是提供一種固液相結(jié)合制備布美諾肽的方法，包括如下步驟：