[發(fā)明專利]特異性針對MMP-9蛋白鋅離子結(jié)合結(jié)構(gòu)域的單域抗體及產(chǎn)品與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911335828.1
• 申請日: 2019-12-20
• 公開（公告）號: CN110885375B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇志鵬;孟巾果;趙澤英
• 申請（專利權(quán)）人: 南京融捷康生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00;A61P29/00;A61P37/02
• 代理公司: 北京超成律師事務所 11646
• 代理人: 董佳

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，提供了一種特異性針對MMP?9蛋白鋅離子結(jié)合結(jié)構(gòu)域的單域抗體及產(chǎn)品與應用。本發(fā)明提供的單域抗體包括互補決定區(qū)CDR包括CDR1、CDR2和CDR3，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.29?SEQ ID NO.34中的任一種；CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.35?SEQ ID NO.41中的任一種；CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.42?SEQ ID NO.50中的任一種。該單域抗體的親和力明顯，可替代傳統(tǒng)單克隆抗體快速表達用于檢測MMP?9蛋白或改變其活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種特異性針對MMP-9 蛋白鋅離子結(jié)合結(jié)構(gòu)域的單域抗體及產(chǎn)品與應用。

背景技術(shù)

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)屬于涉及到細胞外基質(zhì)形成和重塑的細胞外酶家族。這些酶含有一個保守的催化結(jié)構(gòu)域，其中鋅原子經(jīng)三個組氨酸殘基配位。該家族成員組織成包括膠原酶類、明膠酶類、基質(zhì)溶解素類、基質(zhì)溶素類、釉質(zhì)溶解素類及膜MMP類在內(nèi)的多個群組。

MMP-9(基質(zhì)金屬蛋白酶-9)屬于基質(zhì)金屬蛋白酶的明膠酶群組。 MMP-9基因位于染色體20q11.1～13.1，26～27kbp，具有13個外顯子和9個內(nèi)含子。MMP-9主要功能是降解和重塑細胞外基質(zhì)(extracellular matris) 的動態(tài)平衡，基質(zhì)金屬蛋白酶家族包含多個機制金屬蛋白酶，分別負責不同底物的水解和平衡。

MMP-9是鋅依賴的肽鏈內(nèi)切酶，對基質(zhì)蛋白的水解是使其在白血球遷移過程中發(fā)揮重要的作用。MMP-9在骨吸收過程中也扮演一定的角色，可以水解I型和V型明膠以及IV型和V型膠原。該酶的輔因子一般為Zn²⁺或Ca²⁺，一個MMP-9可以結(jié)合2個Zn²⁺或者3個Ca²⁺，MMP-9的酶活性可以被組胺素-3 1/24(組氨酸-5)抑制。MMP-9能分解呼吸道和肺內(nèi)的結(jié)構(gòu)復合物如ECM和基底膜，因此能參與呼吸道和肺的重建，還能調(diào)節(jié)其他蛋白酶及細胞因子的活性，降解α1抗胰蛋白酶，保護中性粒細胞彈性蛋白酶活性，同時，能加強膠原質(zhì)膠體中膠原細胞和MMP-13的溶膠原活動，并且MMP-9還能從白細胞介素8(CXCL8/CL8)上分解一個62氨基酸肽, 使其向中性粒細胞的趨化活性增加10倍，但它也抑制其他中性粒細胞的趨化因子。此外，MMP-9結(jié)合CD44可釋放儲存的TGF-β1，另外，MMP-9 可通過釋放血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)以參與血管生成。

MMP-9與諸多疾病都有相關(guān)性，例如血管性疾病(心、腦)和呼吸系統(tǒng)疾病，另外，有研究表明，MMP-9在肺癌等多種惡性腫瘤中異常高表達，與癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

目前的MMP-9抗體均為傳統(tǒng)單克隆抗體，傳統(tǒng)單克隆抗體技術(shù)一般是指基于小鼠雜交瘤細胞制備的針對目標蛋白的單克隆抗體，該技術(shù)成熟，目前也有利用噬菌體展示技術(shù)分別展示抗體重鏈和輕鏈或者同時展示抗體的Fab片段來代替原來的雜交瘤技術(shù)，但是最終獲得的都是與傳統(tǒng)單克隆抗體結(jié)構(gòu)相同或相似的抗體結(jié)構(gòu)。傳統(tǒng)單克隆抗體的特異性和功效并不完全令人滿意，此外免疫異質(zhì)性較高，改造空間小。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種特異性針對MMP-9蛋白鋅離子結(jié)合結(jié)構(gòu)域的單域抗體。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種與本發(fā)明提供的單域抗體相關(guān)的生物材料。

本發(fā)明的第三目的在于提供本發(fā)明單域抗體的衍生抗體。

本發(fā)明的第四目的在于提供單域抗體的制備方法。

本發(fā)明的第五目的在于本發(fā)明提供的產(chǎn)品的應用。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：