[發明專利]基于駝源Fc片段的免疫原的制備及應用

有效

• 申請號: 201911333414.5
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN111057154B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 蘇志鵬;孟巾果;姚堯;周耿
• 申請（專利權）人: 南京融捷康生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/24;C12N15/85
• 代理公司: 南京冠譽至恒知識產權代理有限公司 32426
• 代理人: 郭曉敏

1.?一種基于駝源Fc片段的免疫原，所述的免疫原由目的蛋白與駝源Fc片段融合而成，其特征在于，所述的駝源Fc片段如SEQ?ID?NO:17-22中的任意一條所示；所述目的蛋白為人源IL-13蛋白。

2.?根據權利要求1所述的一種基于駝源Fc片段的免疫原，其特征在于，所述駝源Fc片段的編碼序列分別如SEQ?ID?NO:23-28中的任意一條所示。

3.?基于駝源Fc片段的免疫原的表達載體，其特征在于，所述的表達載體包括5’-多克隆位點（MCS）-連接區（linker）編碼序列-駝源Fc編碼序列-6個組氨酸（6×His）編碼序列-3’的序列；所述連接區（linker）編碼序列-駝源Fc編碼序列如SEQ?ID?NO:?23-28中的任意一條所示；人源IL-13蛋白的編碼序列插入駝源Fc蛋白表達載體的多克隆位點。

4.權利要求3所述的基于駝源Fc片段的免疫原的表達載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）駝源Fc蛋白編碼序列的獲得；

2）構建駝源Fc蛋白表達載體；

3）將人源IL-13蛋白的編碼序列插入駝源Fc蛋白表達載體的多克隆位點；

步驟1）具體為：分離內蒙古阿拉善雙峰駝外周血中的PBMCs；提取總RNA，通過逆轉錄試劑盒將總RNA進行反轉錄成cDNA；通過基因特異性引物SEQ?ID?NO:?1-?SEQ?ID?NO:?10對反轉錄后的cDNA進行PCR反應，得到5種PCR產物；

步驟2）具體為：通過引物SEQ?ID?NO:?11、16，SEQ?ID?NO:?12、16，SEQ?ID?NO:?13、16，SEQ?ID?NO:?14、16，SEQ?ID?NO:?15、16分別對步驟1）得到的5種PCR產物進行PCR擴增，得到如SEQ?ID?NO:23-28所示的6種DNA序列，然后通過合適的酶切位點將6種DNA序列酶切；將結構為5’-多克隆位點（MCS）-連接區（linker）編碼序列-駝源Fc編碼序列-6個組氨酸（6×His）編碼序列-3’的酶切產物克隆到載體中。

5.權利要求1或2所述的基于駝源Fc片段的免疫原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）采用權利要求4的方法構建基于駝源Fc片段的免疫原的表達載體；

2）將表達載體轉染真核細胞，以實現人源IL-13蛋白與駝源Fc蛋白構成的融合蛋白的表達。

6.?駝源Fc片段在制備免疫原中的應用，其特征在于，所述的免疫原由人源IL-13蛋白與駝源Fc片段融合而成，所述的駝源Fc片段如SEQ?ID?NO:17-22中的任意一條所示；所述的免疫原用于免疫駱駝。

7.權利要求1或2所述的基于駝源Fc片段的免疫原在制備針對人源IL-13蛋白的單域抗體中的應用。