[發(fā)明專利]一種用于檢測伊馬替尼靶向用藥相關基因突變的試劑盒

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• 申請日: 2019-12-21
• 公開（公告）號: CN110964824A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設計）人: 熊慧;柳誠剛;曾海;肖樊;高峰英
• 申請（專利權）人: 武漢百泰基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) 42247
• 代理人: 張文俊

本發(fā)明公開了一種用于檢測伊馬替尼靶向用藥相關基因突變的試劑盒，所述伊馬替尼靶向用藥相關基因包括C?kit和PDGFRA基因，該試劑盒包括分別用于檢測C?kit基因第9、11、13、17號外顯子和PDGFRA基因第12、18號外顯子的引物和熒光探針，通過熒光定量PCR擴增目的基因片段再進行測序反應，該試劑盒還包括蝦堿酶和核酸外切酶I組成的消化酶系，PCR產物純化效果更好且樣品損失少。本發(fā)明試劑盒檢測準確度及靈敏度高，重復性好，操作方便快捷，為伊馬替尼靶向用藥的測試、分析與評估提供了快速、可靠的實驗依據。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，尤其涉及一種用于檢測伊馬替尼靶向用藥相關基因突變的試劑盒。

背景技術

靶向藥物(targeted medicine)是目前最先進的用于治療癌癥的藥物，它與傳統藥物最大的不同就在于其作用機理上。常規(guī)化療藥物是通過對細胞的毒害發(fā)揮作用，由于不能準確識別腫瘤細胞，因此在殺滅腫瘤細胞的同時也會殃及正常細胞，所以產生較大的毒副作用。而靶向藥物是針對腫瘤基因開發(fā)的，它能夠識別腫瘤細胞上由腫瘤細胞特有的基因所決定的特征性位點，通過與之結合(或類似的其他機制)，阻斷腫瘤細胞內控制細胞生長、增殖的信號傳導通路，從而殺滅腫瘤細胞、阻止其增殖。由于這樣的特點，靶向藥物不僅效果好，而且副作用要比常規(guī)的化療方法小得多。使用靶向藥物的治療方法稱為“靶向治療”。

胃腸道間質瘤(Gastrointestinal stromal tumors,GIST)是胃腸道最常見的間葉來源腫瘤，依照目前的GIST診斷標準，新近流行病學研究顯示發(fā)病率0.66～2.20/10萬。GIST對傳統化學治療極不敏感，化療藥物有效率不足5％，進展期中位生存率僅約18個月。研究發(fā)現，干細胞因子表面的跨膜酪氨酸激酶受體C-kit和血小板源性生長因子受體(Platelet-derived growth factor receptor，PDGFR)基因的功能活化突變是GIST發(fā)生發(fā)展的關鍵，針對以上分子靶點的靶向藥物伊馬替尼在2001年被FDA批準用于GIST的治療，改變了這一疾病的治療策略。伊馬替尼(Imatinib mesylate，商品名：格列衛(wèi)，Glivec)是一種高效特異的酪氨酸激酶抑制劑，可以通過接合C-kit和PDGFRA的酪氨酸激酶活性中心，抑制其活性，進而達到治療腫瘤的目的。

在GIST中C-kit基因突變占75％-80％，PDGFRA基因突變占5％-10％，非C-kit和PDGFRA基因突變占10％-15％。不同的基因突變類型與胃腸道間質瘤靶向治療的選擇、伊馬替尼劑量的評估、療效及預后關系密切。已發(fā)現的C-kit基因突變類型有4種，9號外顯子(5％-10％)、11號外顯子(57％-71％)、13號外顯子(約5％)和17號外顯子(約5％)；PDGFRA基因突變類型主要有2種，12號外顯子(約3％)和18號外顯子(約97％)。臨床研究表明，GIST中C-kit基因的突變情況與伊馬替尼分子靶向治療的療效相關：存在11號外顯子突變患者的療效最好，存在9號外顯子突變的患者療效次之，而C-kit基因為野生型時，伊馬替尼的療效最差。另外，對于9號外顯子突變的患者，提高伊馬替尼用藥劑量可顯著提高療效。PDGFRA基因12號外顯子及18號外顯子發(fā)生突變的多數GIST患者對伊馬替尼也很敏感，但PDGFRA基因18號外顯子的D842V突變會導致GIST患者對伊馬替尼原發(fā)耐藥。

因此，針對原發(fā)GIST或復發(fā)轉移的GIST，明確其C-Kit和PDGFRA基因突變狀態(tài)，對GIST進行精確的分子分型，篩選靶向藥物伊馬替尼適宜患者，根據基因突變類型推薦合理治療劑量，是GIST個體化診療的重要環(huán)節(jié)。然而，現有市售的伊馬替尼靶向用藥相關基因C-kit或PDGFRA突變的試劑盒只能檢測其中一種基因的突變，部分檢測方法靈敏度低，不能準確檢測出C-kit基因或PDGFRA基因是否發(fā)生突變，并且檢測成本高。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明提出了一種用于檢測伊馬替尼靶向用藥相關基因突變的試劑盒，可用來檢測樣本組織中C-kit和PDGFRA基因是否發(fā)生突變，檢測方便快捷，靈敏度高，并且檢測成本較低。