[發明專利]一種Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法

在審

• 申請號: 201911327428.6
• 申請日: 2019-12-20
• 公開（公告）號: CN110951724A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 劉寶山;姚龍泉;吳長德;羅桂燕
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發明公開了一種使用Trizol試劑快速提取核酸DNA和/或RNA的方法，可采用Trizol試劑和收集柱對樣品進行DNA和RNA的分別提取或同時提取，相比于使用Trizol提取RNA和DNA的經典方法，提取時間短，穩定性好，可以滿足不同試驗對DNA和RNA的不同要求，非常有利于對材料中的DNA和RNA病原進行檢測，同時也可以減少材料使用，對難得材料尤其重要。本發明提供的Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法，對于分子生物學試驗具有重要的實用性。

技術領域

本發明涉及核酸提取技術領域，具體涉及一種Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法。

背景技術

Trizol試劑可以快速提取人、動物、植物、細菌不同組織的總RNA，該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×10⁶)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>10⁷)均有較好的分離效果。Trizol試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內完成。Trizol試劑抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠作RNA印跡分析、斑點雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護分析和分子克隆。并且利用DNA、RNA和蛋白質在不同溶液中的溶解性質，可以通過分層分別將不同層中的RNA(上層)、DNA(中層)、蛋白質(下層)分離純化出來，效率極好。

然而，在Trizol試劑提取RNA的過程中，需要長時間離心進行核酸沉淀，沉淀在去除上清的時候還容易丟掉，造成提取效果的穩定性差。在提取DNA的過程中，除了上面的問題之外，還需要使用檸檬酸鈉乙醇溶液反復洗滌，每次洗滌時間長(30min)，費時費力。

發明內容

本發明的目的是提供一種使用Trizol試劑和收集柱簡單快速對樣品進行DNA和RNA的分別提取或同時提取的方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法，其特征在于，

1)同時提取DNA和RNA時包括以下操作步驟：

(1)取小于50mg新鮮材料置于研磨器中，加入0.5mL Trizol試劑，快速研磨粉碎，然后轉移到1.5mL去RNA酶的離心管中，不斷顛倒混勻，直至溶液清亮，其中新鮮材料包括組織、細胞、血液、血漿、分泌物、培養液中的任意一種；

(2)加入600μL分離液，其中分離液由100-200μL氯仿、100-300μL乙醇、100-200μL異丙醇組成，振蕩混勻；

(3)將振蕩混勻后的溶液分兩次轉移到已放入收集管的收集柱內12000rpm離心1min，每次離心后倒掉收集管中的液體；

(4)向收集柱中加入600μL的純化液1，其中純化液1包括0.05-0.3M檸檬酸鈉、5％-30％乙醇的DEPC水，12000rpm離心處理1min，倒掉收集管中的液體，然后再向收集柱中加入600μL的純化液1，12000rpm離心處理1min，倒掉收集管中的液體；

(5)向收集柱內加入500μL的純化液2，其中純化液2位含70％-80％乙醇的DEPC水，12000rpm離心處理2min；

(6)小心取出收集管，將收集柱轉移到一個新的離心管中，加入100μL DEPC水溶解10min后，12000rpm離心2min，得到含有DNA和RNA的核酸溶液；

2)提取RNA時包括以下操作步驟：

(1)取小于50mg新鮮材料置于研磨器中，加入0.5mL Trizol試劑，快速研磨粉碎，然后轉移到1.5mL去RNA酶的離心管中，不斷顛倒混勻，直至溶液清亮，其中新鮮材料包括組織、細胞、血液、血漿、分泌物、培養液中的任意一種；