[發明專利]豬源OPN單克隆抗體、其雜交瘤細胞株及應用

有效

• 申請號: 201911323477.2
• 申請日: 2019-12-20
• 公開（公告）號: CN111172116B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 張守全;陳云;王凱;趙志宏
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/24;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜

本發明公開了一種豬源OPN單克隆抗體、其雜交瘤細胞株及應用。該分泌豬源OPN單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其分類命名為雜交瘤細胞株Cy2，于2019年12月19日保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏地址為中國.武漢.武漢大學，保藏號為CCTCC NO：C2019293。所述的豬源OPN單克隆抗體由上述雜交瘤細胞株或其傳代細胞株分泌產生。該單克隆抗體適用于快速準確地檢測豬組織、精液或豬卵母細胞中OPN蛋白的含量，因此，可將該單克隆抗體用于制備相關的檢測試劑盒或膠體金試紙等，為豬源OPN的深入研究打下堅定的基礎。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，特別涉及一種豬源OPN單克隆抗體、其雜交瘤細胞株及應用。

背景技術

隨著非洲豬瘟的侵襲，養豬業受到了嚴重的沖擊。雖然情況受到了控制，但養豬的行情卻不樂觀，如何盡快的恢復生產成績，如何提高公豬的繁殖性能？農場通過技術手段，篩選出繁殖力高的公豬，進行采精和配種，但是收集繁殖力相關的數據費時又費力(Leno-Colorado et al,2017)。最好的方法是使用新技術來協助繁殖。豬的精漿和精子膜蛋白與精子的成熟和保護機制有關(Dietrich et al,2019；Druart et al,2019)。這些蛋白質可以改善精子的質量，并且可以通過篩選，鑒定出顯著改善精子性能的其他蛋白質，一方面，可以將此類蛋白質直接添加到精液中來提高整個種群的繁殖力。另一方面，可以將此類蛋白質的單抗做成ELISA試劑盒，直接檢測公豬的精液中的目的蛋白含量，篩選出高繁殖力的公豬，用高繁精液進行輸精，將大大增加整個種群的繁殖力。

OPN全稱為osteopontin，即骨橋蛋白，主要是由精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸三肽序列組成。最早是在骨基質和牙齒中被分離出來的，其主要是通過與受體結合發揮作用，直接或間接的激活細胞內信號途徑，介導細胞與細胞、細胞與細胞外基質之間的相互作用，從而參與調控細胞的生存。通過微衛星定位和PCR技術，發現OPN與豬的繁殖性狀有關，特別是與二花臉和蘇鐘豬的產仔數顯著相關，可以作為提高豬產仔數的一個遺傳標記(King et al,2003；Southwood et al,1998；Short et al,1997b；Liaw et al,1999；孟慶利et al,2005)，在母豬的輸卵管、子宮和胎盤中，通過蛋白免疫印跡發現該蛋白的表達；同時，通過蛋白免疫印跡和免疫熒光檢測，發現OPN蛋白在公豬的睪丸和精母細胞中表達，在支持細胞中也有少量的表達(Garlow et al,2002；Hernandez et al,2013)。在研究OPN與公豬的精子的關系時發現，OPN與公豬精子的活力顯著正相關，且OPN蛋白可以促進體外受精的豬胚胎分裂率和減少多精入卵率(Lin et al,2006；Hao et al,2008)。以上的研究表明，OPN蛋白對提高公豬的繁殖力起著不可或缺的作用，對豬源OPN的研究還需更近一步。

現在國內外都沒有出現真核表達的豬源OPN蛋白單克隆抗體的報道，對于重組蛋白的表達，相對于原核系統，真核系統表達的蛋白更具有可控性，結構更加接近于天然蛋白，生物活性更強。對于抗體來說，相對于多抗，單抗更具特異性，結果更具有一致性。豬源OPN蛋白會被MMP-2剪切，出現兩條蛋白帶：33.7kDa和64.7kDa。目前，豬源OPN多抗可識別多個抗原決定簇，做免疫印跡時，非特異性條帶很多；做免疫組化時，背景較深，假陽性的幾率比較大；做免疫熒光時，識別的部位不單一。因此，需要制備具有良好反應性的單克隆抗體，進而實現對豬源OPN蛋白功能更深入的研究。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種分泌豬源OPN單克隆抗體的雜交瘤細胞株，可以作為單克隆抗體恒定的再生源。

本發明的另一目的在于提供一種豬源OPN單克隆抗體，該單克隆抗體可用于快速準確地檢測豬組織和精液中OPN蛋白的含量。

本發明的再一目的在于提供上述豬源OPN單克隆抗體的應用。