[發(fā)明專利]檢測(cè)沼蝦桿套病毒-1的特異性引物、探針及快速檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911323000.4
• 申請(qǐng)日: 2019-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN110872638B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘曉藝;沈錦玉;藺凌云;姚嘉赟;尹文林;曹錚
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省淡水水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 梁寅春

1.檢測(cè)沼蝦桿套病毒-1的引物探針混合液，其特征在于，所述混合液由引物組A和Taqman熒光探針B組成，Taqman熒光探針B的5’端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)；

所述引物組A包含引物MrRoV-q119F和引物MrRoV-q119R；

所述引物MrRoV-q119F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；

所述引物MrRoV-q119R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；

所述Taqman熒光探針B的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的混合液，其特征在于，所述熒光報(bào)告基團(tuán)選自6-羧基熒光素、六氯-6-甲基熒光素、VIC熒光染料、四氯-6-羧基熒光素、羧基-X-羅丹明、6-羧基四甲基羅丹明、磺酰羅丹明、6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基熒光素琥珀酰亞胺酯、花菁3、花菁3.5、花菁5、花菁5.5中的一種；所述熒光淬滅基團(tuán)選自6-羧基四甲基羅丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬滅劑1、黑洞淬滅劑2、黑洞淬滅劑3中的一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的混合液，其特征在于，所述熒光報(bào)告基團(tuán)為6-羧基熒光素，所述熒光淬滅基團(tuán)為黑洞淬滅劑1。

4.一種沼蝦桿套病毒-1熒光定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述試劑盒具有權(quán)利要求1、2或3所述的混合液，還具有RT-qPCR反應(yīng)液、陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品，所述RT-qPCR反應(yīng)液為探針法熒光定量一步法RT-qPCR反應(yīng)液，所述陰性質(zhì)控品為滅菌生理鹽水，所述陽(yáng)性質(zhì)控品是含有沼蝦桿套病毒-1復(fù)制酶基因的載體。

5.一種如權(quán)利要求4所述的試劑盒在制備檢測(cè)沼蝦桿套病毒-1產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

采用商業(yè)RNA提取試劑盒提取的待檢沼蝦樣品的總RNA，再將3uL?RNA加入到含所述引物探針混合液和所述RT-q?PCR反應(yīng)液的PCR管中，混勻后進(jìn)行一步法RT-qPCR，反應(yīng)條件為：42℃20-30分鐘，95℃5-8分鐘，95℃10-15秒鐘，60℃30-40秒鐘，共38-42個(gè)循環(huán)；熒光信號(hào)收集設(shè)定為FAM，60℃反應(yīng)末；

結(jié)果判斷：檢測(cè)通道不出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，判為沼蝦桿套病毒-1陰性；檢測(cè)通道出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判為沼蝦桿套病毒-1陽(yáng)性；檢測(cè)通道出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，且Ct值＞35時(shí)，需重新進(jìn)行檢測(cè)，若仍然Ct值＞35時(shí)，則判為沼蝦桿套病毒-1陰性。