[發明專利]一種人工神經移植物及制備方法

有效

• 申請號: 201911322434.2
• 申請日: 2019-12-20
• 公開（公告）號: CN111068118B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 全大萍;饒子龍;陳詩浩;白瑩;周晶;朱慶棠;劉小林;楊習鋒;曾晨光
• 申請（專利權）人: 中山大學;中山大學附屬第一醫院;廣州新誠生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/18;A61L27/52
• 代理公司: 廣州藍晟專利代理事務所(普通合伙) 44452
• 代理人: 陳梓赫;歐陽凱

1.一種人工神經移植物的制備方法，其特征在于，包括：

(1)取一定質量的可降解聚酯，溶于有機溶劑中，攪拌1～2天使其充分溶解，制得聚酯溶液；

(2)將聚酯溶液轉移至注射器中，并安置于注射泵上，進行靜電紡絲加工得到神經套管；

(3)靜電紡絲加工結束之后，將神經套管裁剪為長度5～60mm；

(4)取一定質量去細胞基質粉末，加入pH為2的鹽酸溶液中，其濃度為0.5％～2％w/v，加入胃蛋白酶，其與去細胞基質的質量比為1:10，25℃下攪拌8～48h，放入超高速離心機以溫度4℃，轉速10000～40000rpm超速離心30～60分鐘，吸取上層溶液，制得去細胞基質消化液；

(5)使用0.1mol/L的NaOH溶液將去細胞基質消化液的pH調至8.0，加0.1mol/L的HCl溶液調pH至7.4，放置在4℃環境下備用，在4℃環境下加入10×PBS溶液，其體積為上述調節pH后的去細胞基質消化液體積的1/9，制得去細胞基質溶膠，在4℃環境下加入PBS溶液，將去細胞基質溶膠稀釋至去細胞基質最終濃度0.2～1％w/v；

(6)使用灌注設備在4℃環境下將去細胞基質溶膠灌注到神經套管中；

(7)將灌注有去細胞基質溶膠的神經套管置于37℃環境下10～30分鐘，使去細胞基質自組裝發生溶膠-凝膠轉變，制得去細胞基質凝膠；

(8)去細胞基質凝膠的定向冷凍結晶，將灌注有去細胞基質凝膠的神經套管置入特氟龍管腔中，其中神經套管方向與特氟龍管腔方向一致，其下端與一個銅制導熱裝置接觸，銅制導熱裝置的下端插入一個冷源裝置中，冷源裝置提供-196℃至-20℃的溫度，去細胞基質中的液態水分子在冷源的定向傳導作用下發生定向結晶，整個定向冷凍過程持續30～60分鐘；

(9)將經定向冷凍結晶的去細胞基質及神經套管置于凍干機中凍干，其中凍干溫度-60℃到0℃，凍干時間24～48h，最終制得人工神經移植物。

2.根據權利要求1所述的人工神經移植物的制備方法，其特征在于，在步驟一中，可降解聚酯包括聚乳酸，聚乳酸-三亞甲基碳酸酯(P(LA-TMC))，聚乙醇酸，聚(D,L-乳酸-co-乙醇酸)，聚(D,L-乳酸-co-己內酯)，聚(D,L-乳酸-co-三亞甲基碳酸酯)，有機溶劑包括2,2,2-三氟乙醇，六氟異丙醇，氯仿，二氯甲烷。

3.根據權利要求1所述的人工神經移植物的制備方法，其特征在于，在步驟二中，聚酯溶液的注射速率為0.5～4mL /h；注射器的注射針頭內徑為0.20～1.60mm，注射針頭所接電壓為5～20kV ，其以2～5cm/s的速率進行左右往復掃描；接收器位于注射針頭下方，為一個旋轉的金屬圓棒，其直徑為0.5～10mm，旋轉速率為60～500rpm，且其連接一個高壓電源，電壓為0～-3kV 。

4.根據權利要求1所述的人工神經移植物的制備方法，其特征在于，在步驟四中，去細胞基質的來源包括人、豬、牛的腦、脊髓、皮膚、小腸粘膜下層、脂肪。

5.一種人工神經移植物，其特征在于，通過權利要求1-4任意一項所述的人工神經移植物的制備方法制備而成。