[發明專利]體外大量擴增惡性腫瘤腹水浸潤的淋巴細胞的方法

在審

• 申請號: 201911318914.1
• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN111286486A
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 董晨;倪凌;金莉萍;蔡東莉
• 申請（專利權）人: 清華大學;上海市第一婦嬰保健院
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 肖陽

本發明提出了一種培養基，所述培養基用于體外擴增惡性腫瘤腹水來源的免疫細胞。該培養基包括：基礎培養基以及促增殖因子，所述基礎培養基為RPMI?1640，所述促增殖因子由重組人IL?2以及Dynabeads人T細胞激活因子CD3/CD28組成。發明人發現，在腹水免疫細胞的體外增殖過程中，單獨使用rhIL?2比聯合其他的細胞因子在促進腹水免疫細胞的體外增殖方面具有顯著優勢。根據本發明實施例的培養基用于腹水來源的免疫細胞的體外擴增，可短時間內大量獲得具有免疫殺傷效果的免疫細胞。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，本發明涉及體外大量擴增惡性腫瘤腹水浸潤的淋巴細胞的方法，更具體地，本發明涉及培養基以及淋巴細胞的體外擴增方法。

背景技術

免疫治療是新興的一種腫瘤治療方式，已經被列為繼手術、放療、化療后的第四種治療方式，在腫瘤的綜合治療中逐漸發揮重要作用。2010年，美國FDA批準世界上第一個細胞免疫治療產品Provenge上市，充分顯示出細胞免疫治療在腫瘤治療中的價值。

目前常用的腫瘤浸潤淋巴細胞(tumor-infiltrating lymphocyte，TIL)是存在于腫瘤間質內的以淋巴細胞為主的異質性淋巴細胞群體，大多聚集在腫瘤周圍或其間質呈套狀圍繞癌巢。其主要成分是存在于腫瘤間質內的T淋巴細胞，小部分為MHC非限制性的NK細胞，其共同特征為表達T細胞受體(T cell receptor，TCR)。TIL來自腫瘤組織區域，可特異識別自體腫瘤，具有特異的MHC限制性溶解腫瘤活性。美國NCI的Rosenberg等首次證實，從實體瘤組織分離的TIL在體外經IL-2激活并大量擴增后，可用于晚期黑色素瘤患者的治療，其治療效果遠遠高于之前發展的LAK(lymphokine activatedkiller cells)細胞治療技術(文獻：Expansion of human tumor infiltrating lymphocytes for use inimmunotherapy trials.J Immunol Methods 1987)。近年發表的多篇臨床試驗報道顯示，TIL細胞免疫治療可治愈20％～40％晚期黑色素瘤，充分顯示出TIL作為細胞免疫治療手段在腫瘤治療中的潛力(文獻：A new approach to the adoptive immunotherapy ofcancer with tumorinfiltrating lymphocytes.Science1986)。

然而，目前的腫瘤浸潤淋巴細胞的體外擴增步驟繁瑣、耗時，增殖效果并不理想，不能在短時間內有效獲得可供臨床治療使用的淋巴細胞。

發明內容

本申請是基于發明人對以下事實和問題的發現和認識作出的：

發明人發現，在卵巢癌患者腹水中浸潤有大量的腫瘤相關免疫細胞(TALs)。發明人通過分離卵巢癌患者腹水中的免疫細胞，優化免疫細胞的體外擴增方法，成功實現了在短時間內獲得大量的可供臨床使用的具有免疫殺傷效果的免疫細胞。

在本發明的第一方面，本發明提出了一種培養基，所述培養基用于體外擴增惡性腫瘤腹水來源的免疫細胞。根據本發明的實施例，所述培養基包括：基礎培養基以及促增殖因子，所述基礎培養基為RPMI-1640，所述促增殖因子由重組人IL-2以及Dynabeads人T細胞激活因子CD3/CD28組成。發明人發現，在腹水免疫細胞的體外增殖過程中，重組人IL-2(rhIL-2)聯合rhIL-10，rhIL-15或是rhIL-21，相比于rhIL-2單獨使用，增殖速率反而減緩，即單獨使用rhIL-2比聯合其他的細胞因子在促進腹水免疫細胞的體外增殖方面具有顯著優勢。根據本發明實施例的培養基用于腹水來源的免疫細胞的體外擴增，可短時間內大量獲得具有免疫殺傷效果的免疫細胞。

根據本發明的實施例，上述培養基還可以進一步包括如下附加技術特征至少之一：