[發明專利]一種大麥黃花葉病病毒的幼苗葉片快速接種方法

有效

• 申請號: 201911316891.0
• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN111066516B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 潘雨涵;許如根;呂超;郭寶健;王菲菲
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06;A01G22/20
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 劉妍妍

本發明屬于農業技術領域，涉及植物病害接種技術，具體涉及一種大麥黃花葉病病毒的幼苗葉片快速接種方法，包括如下步驟：選取具有大麥黃花葉病病害特征的大麥，取其大麥黃花葉病病斑明顯的綠葉，低溫保存備用；將解凍的病葉與K₂HPO₄緩沖液、石英砂混合，碾壓病葉使其出汁得到病毒汁液；使用棉質手套蘸取病毒汁液及石英砂，從葉片的基部夾住葉片向葉尖端滑動，完成接種。本方法采用棉質手套夾持快速摩擦接種，能夠在不影響被接種幼苗正常生長的前提下，簡化操作過程、靈敏性高、提高接種效率。

技術領域

本發明屬于農業技術領域，涉及植物病害接種技術，具體涉及一種大麥黃花葉病病毒的幼苗葉片快速接種方法。

背景技術

大麥黃花葉病是歐亞冬大麥區的主要病害之一，常發生在我國長江中下游及黃淮冬大麥區，尤以江浙滬地區發病嚴重。大麥黃花葉病是由大麥黃花葉病毒(Barley yellowmosaic virus,BaYMV)、大麥溫和花葉病毒(Barley mild mosaic virus,BaMMV)或兩者病毒復合體引起的病毒病。在田間條件下，病毒以土壤中的禾谷多黏菌(Polymyxa graminis)作傳播介體，從大麥根部侵染發病。因病毒寄存于真菌介體內在土壤中存活的時間長，大麥黃花葉病難以采用化學方法防治。挖掘抗病種質、培育抗病品種是防控該病害最經濟有效的途徑。該病害抗性主要采取田間抗性鑒定，發病程度受年度間氣候影響較大，每年僅能鑒定一次。因此，在室內建立一種大麥黃花葉病病毒的幼苗葉片快速接種方法是必要的。

大麥黃花葉病毒已有的室內接種方法包括常規汁液摩擦接種、噴槍接種及禾谷多粘菌游動孢子接種。常規汁液摩擦接種是將病葉組織在研缽中碾壓，再加入少量磷酸緩沖液與石英砂，混勻成含石英砂的病毒汁液，用脫脂棉球或直接用碾碎的植物組織蘸取汁液，在健康大麥幼苗葉片上輕輕摩擦2-3次，一周后重復接種。該方法存在同一葉片正反面需多次摩擦，且接種力度較難掌握，過輕影響接種成功率；力度過重則葉片死亡，不適用大批量樣品接種。噴槍接種是利用噴射壓力將加入金剛砂的病毒懸浮液噴射在植株葉片表面，該方法速度較快，但操作難度較大，極易難以噴涂的均勻，且設備費用較高，存在安全隱患。無論常規汁液摩擦接種或噴槍接種，在被接種葉片表面殘留較多的石英砂或金剛砂易壓彎甚至折斷幼苗葉片，影響后期的生長。有科研工作者在接種完成后使用清水沖洗殘留物，無形中增加工作量、病毒汁液的濃度也會因此降低，影響接種效果；禾谷多粘菌游動孢子接種是通過沙培體系，利用病根粉末與感病品種培養帶毒禾谷多黏菌孢子，再將孢子懸浮液中加入經發芽的大麥苗完成接種。其優點是模擬田間自然發病，避免病毒汁液接種淘汰抗真菌介體而不抗病毒的大麥品種的局限性。缺點是體系的構建非常復雜，真菌介體也存在侵染效率的問題，試驗誤差較大。

因此，急需發明一種簡捷、高效的大麥黃花葉病病毒的幼苗葉片接種方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種大麥黃花葉病病毒的幼苗葉片快速接種方法，本方法采用棉質手套夾持快速摩擦接種，能夠在不影響被接種幼苗正常生長的前提下，簡化操作過程、提高接種效率，克服現有接種方法的部分缺陷。

為了達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種大麥黃花葉病苗期室內快速接種方法，包括如下步驟：

選取具有大麥黃花葉病病害特征的大麥，取其大麥黃花葉病病斑明顯的綠葉，低溫保存備用；

將解凍的病葉與K₂HPO₄緩沖液、石英砂混合，碾壓病葉使其出汁得到病毒汁液；

用滅菌后的棉布手套蘸取病毒汁液及石英砂，從葉片的基部夾住葉片向葉尖端滑動，完成接種。

進一步的，所述大麥病葉的保存條件為-80℃冰箱保存。