[發明專利]一種清熱養陰活血祛瘀口服液成分分離及鑒別方法

有效

• 申請號: 201911316210.0
• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN112505230B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 張蕙;夏云;崔凌云;湯茜;李劍;徐向陽;周紅燕;田麗娟;楊俊;劉文一;蔣舒瑤;倪潔
• 申請（專利權）人: 金陵藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/95
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;邢賢冬

1.一種清熱養陰活血祛瘀口服液成分分離方法及鑒別方法，其特征在于包括清熱養陰活血祛瘀口服液供試品溶液的成分分離：取清熱養陰活血祛瘀口服液供試品溶液，調節pH值至6～8，取不超過1倍柱體積上聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱，用1～3倍柱體積水抽洗，直至抽干，棄去水液，依次用2～3倍柱體積20%甲醇、1～3倍柱體積40%甲醇、1～3倍柱體積60%甲醇、1～3倍柱體積甲醇抽洗，每次均抽干，收集各洗脫液；取20%甲醇洗脫液進行牛膝鑒別，取40%甲醇洗脫液進行山銀花鑒別，取60%甲醇洗脫液進行金銀花鑒別，取甲醇洗脫液進行石斛鑒別；

其中，采用薄層色譜法鑒別清熱養陰活血祛瘀口服液中藥材金銀花，包括：

供試品溶液制備：取60%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣加50%乙醇溶解，作為供試品溶液；

對照品溶液的制備：取木犀草苷對照品，加70%乙醇制成木犀草苷濃度0.1mg/1mL的對照品溶液；

對照藥材溶液的制備: 取金銀花對照藥材1g，加70%乙醇10～100mL，超聲0.5～4小時，放冷，過濾，濾液水浴蒸干，殘渣加水溶解，過濾，濾液離心5～30分鐘，上清液調節pH值至6～8，上聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱，依次用12mL水、12mL 20%甲醇、12mL 40%甲醇抽洗，直至抽干，棄去抽洗液，繼續用12mL 60%甲醇抽洗，直至抽干，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣加50%乙醇溶解，作為金銀花對照藥材溶液；

金銀花薄層色譜鑒別：吸取供試品溶液、對照品溶液、對照藥材溶液各2μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以體積比為5:5:1的乙醇-水-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2.根據權利要求1所述的清熱養陰活血祛瘀口服液成分分離方法及鑒別方法，其特征在于取清熱養陰活血祛瘀口服液供試品溶液適量，調節pH值至7，取5/6倍柱體積上聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱，用1倍柱體積水抽洗，直至抽干，棄去水液，依次用2倍柱體積20%甲醇、3倍柱體積40%甲醇、3倍柱體積60%甲醇、1倍柱體積甲醇抽洗，每次均抽干，收集各洗脫液。

3.根據權利要求1所述的清熱養陰活血祛瘀口服液成分分離方法及鑒別方法，其特征在于上樣前對聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱進行預處理：分別用甲醇和水各3倍柱體積抽洗，直至抽干。

4.根據權利要求1所述的清熱養陰活血祛瘀口服液成分分離方法及鑒別方法，其特征在于所述的聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱的規格500mg/6mL。

5.根據權利要求1所述的清熱養陰活血祛瘀口服液成分分離方法及鑒別方法，其特征在于采用薄層色譜法鑒別清熱養陰活血祛瘀口服液中藥材牛膝，包括：

供試品溶液制備：取20%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣加50%乙醇溶解，作為供試品溶液；

β-蛻皮甾酮對照品溶液的制備：取β-蛻皮甾酮對照品，加甲醇制成β-蛻皮甾酮濃度1mg/mL的對照品溶液；

對照藥材溶液的制備: 取牛膝對照藥材粉末1g，加80%甲醇10～100mL，加熱回流1～6小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水5～30mL，微熱使溶解，上D101型大孔吸附樹脂柱，依次用100mL水、100mL 20%乙醇洗脫，棄去洗脫液，用80%乙醇100mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加80%甲醇溶解，作為對照藥材溶液；

牛膝薄層色譜鑒別：吸取供試品溶液、β-蛻皮甾酮對照品溶液、對照藥材溶液5～10μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以體積比為4:1的乙酸乙酯-乙醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液加熱顯色；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。