[發(fā)明專利]一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法

在審

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• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN111118097A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發(fā)明（設計）人: 胡利敏;賈全;張鎖慶;田洪年;任峰;張建麗;楊夢德;魏寶軍;劉樹斌
• 申請（專利權）人: 華北制藥河北華民藥業(yè)有限責任公司
• 主分類號: C12P35/02
• 分類號: C12P35/02
• 代理公司: 石家莊眾志華清知識產權事務所(特殊普通合伙) 13123
• 代理人: 王忠良

1.一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：以頭孢氨芐結晶母液為原料，向原料中加入堿性試劑和頭孢氨芐裂解酶，經過脈沖超聲處理，分離出頭孢氨芐裂解酶和苯甘氨酸固體，過濾出的液體經過結晶得到7-ADCA固體。

2.根據權利要求1所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：包括如下步驟：

A．調節(jié)PH值：將頭孢氨芐結晶母液用堿性試劑調節(jié)pH值為7.0～8.0，控制溫度得到反應液；

B．酶解反應：向反應液中加入頭孢氨芐裂解酶進行酶解反應，在酶解反應開始后對酶解體系采用脈沖超聲處理一段時間，直至頭孢氨芐殘留合格，終止酶解反應；

C．過濾得到頭孢氨芐裂解酶和苯甘氨酸固體：過濾分離出頭孢氨芐裂解酶、苯甘氨酸固體和過濾液，過濾液進行脫色處理，得到脫色液；

D．結晶得到7-ADCA：將脫色液用酸性試劑調節(jié)pH值進行結晶，控制結晶溫度，養(yǎng)晶一段時間，然后過濾、洗滌、干燥得到7-ADCA。

3.根據權利要求2所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：所述步驟A中結晶母液中頭孢氨芐初始含量為（15～20）mg/ml，堿性試劑為氨水或三乙胺，濃度為0.5mol/L，溫度為10～20℃。

4.根據權利要求3所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：所述步驟A中頭孢氨芐裂解酶用量為結晶母液中所含頭孢氨芐理論重量的0.5～1倍。

5.根據權利要求2所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：所述步驟B中頭孢氨芐含量≤0.5mg/ml時殘留合格，終止酶解反應，檢測方式采用HPLC檢測，脈沖超聲處理條件為：頻率20kHz，功率10W/L～50W/L、工作/間歇比為0.5s/1s～5s/1s，處理時間10-60min。

6.根據權利要求2所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：所述步驟C中酶解后的結晶母液經過篩網過濾器得到頭孢氨芐裂解酶，過濾后的懸濁液經過離心機4500rpm離心10～20min得到苯甘氨酸固體。

7.根據權利要求6所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：所述篩網過濾器的篩網目數為80～120目。

8.根據權利要求2所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：步驟C中脫色劑為活性炭或白土，脫色劑的加入量為原料質量的1～10%，脫色時間為0.5～1h。

9.根據權利要求2所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：所述步驟D中酸性試劑為HCl氣體、Cl₂氣體、CO₂氣體中任意一種，所述脫色液進行兩次結晶。

10.根據權利要求9所述的一種超聲輔助頭孢氨芐裂解酶制備7-ADCA的方法，其特征在于：所述第一次結晶的pH值范圍為4.5～5.0，反應溫度為20～40℃，養(yǎng)晶時間為30～120min；第二次結晶的pH值范圍為3.5～4.0，反應溫度為0～20℃，養(yǎng)晶時間為30～90min。