[發(fā)明專利]一種包含血紅蛋白抗原結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911310313.6
• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN113004402B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔鵬;何志強(qiáng);孟媛;鐘冬梅;姜瑢瑢;覃婷;游輝;王晨
• 申請（專利權(quán)）人: 東莞市朋志生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;G01N33/72;G01N33/574
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發(fā)明提供一種包含血紅蛋白結(jié)合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白，并對該結(jié)合蛋白的制備、應(yīng)用等方面進(jìn)行研究。所述的結(jié)合蛋白活性強(qiáng)，與糞便中血紅蛋白具有很高的親和力，可有效應(yīng)用于糞便潛血的檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種包含血紅蛋白抗原結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白。

背景技術(shù)

近幾年，消化道疾病類型趨于多樣性，腸道腫瘤的發(fā)生率和死亡率也呈逐年上升趨勢。糞便潛血試驗是臨床中較為常見的檢測技術(shù)，對消化道出血診斷有重要價值。消化道腫瘤早期患者很大幾率會出現(xiàn)潛血試驗陽性,晚期病人的潛血陽性率更高并且呈持續(xù)性陽性,因此糞便潛血檢查可作為消化道腫瘤篩選的首選指標(biāo)。

糞便潛血(FecalOccultBlood，F(xiàn)OB)是指消化道出血量在5ml/d以下，肉眼不見血色，顯微鏡下不見紅細(xì)胞被破壞的出血。通過檢測糞便潛血中血紅蛋白，診斷消化道出血。因此，糞便中的血紅蛋白(Hb，Hemoglobin)在臨床被看作是直腸癌、結(jié)腸癌的腫瘤重要標(biāo)志物之一。

化學(xué)法來檢測糞便潛血是利用血紅蛋白(Hb)中含有亞鐵血紅素具有類似過氧化物酶作用而設(shè)計。這類方法的氧化顯色劑較多，如聯(lián)苯胺、鄰-甲苯胺、鄰聯(lián)甲苯胺、愈創(chuàng)木、還原酚酞、氨基吡啉、無色孔雀綠、四甲基聯(lián)苯胺、二苯胺、二甲基聯(lián)苯胺等。化學(xué)法雖簡便易行，使用廣泛，但特異性較低、干擾因素較多。動物血、肉、肝臟及富含葉綠素食物、鐵劑、維生素C、中藥等均可引起假陽性。

近年研發(fā)出膠體金免疫層析法。利用血液中血紅蛋白(Hb)的亞鐵血紅素特異性結(jié)合人Hb抗原，檢測抗人血紅蛋白抗體。血紅蛋白單克隆抗體檢測的免疫法與傳統(tǒng)的化學(xué)法相比，靈敏度、特異性都有了很大的提高，且不受飲食或相關(guān)藥物的影響，對早期腫瘤的診斷和治療發(fā)揮了重要的作用。

為便于精確檢測潛血，避免假陽性、特異性差的特點，生產(chǎn)高活性和親和力的抗人血紅蛋白單克隆抗體具有很強(qiáng)的實用價值。目前使用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的鼠單克隆抗體已被廣泛的應(yīng)用于科研、臨床診斷和治療。但由于雜交瘤方式生產(chǎn)采用小鼠腹腔誘生，受小鼠個體影響特較大，存在生產(chǎn)不穩(wěn)定、批間差異大、小鼠自身抗體純化難度大等問題。同時本領(lǐng)域常用的血紅蛋白結(jié)合蛋白存在活性差、親和力低等問題，無法較好的應(yīng)用于血紅蛋白的檢測。因此，本領(lǐng)域?qū)τ诶弥亟M技術(shù)生產(chǎn)高活性高親和力有效穩(wěn)定且特異性結(jié)合血紅蛋白并對其進(jìn)行檢測的抗體有強(qiáng)烈的需求。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種與血紅蛋白結(jié)合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白，并對結(jié)合蛋白的制備、應(yīng)用等方面進(jìn)行研究。

所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括選自下述氨基酸序列的至少一個互補(bǔ)決定區(qū)，或與下述氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)具有至少80％的序列同一性且與血紅蛋白具K_D≤9.52×10^-8mol/L的親和力；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH1為G-Y-X1-F-X2-S-Y-X3-M-H，其中：

X1是T或S，X2是T或S，X3是I、V或L；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH2為Y-I-X1-P-Y-X2-D-G-T-X3-Y-N-E-K-X4-K-G，其中：

X1是Q、H或N，X2是Q或N，X3是D或E，X4是F或A；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH3為A-X1-X2-Y-L-Y-X2-M-D，其中：

X1是K或R，X2是GG或N，X3是I、L或V；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VL1為R-A-S-X1-N-I-X2-S-X3-L-A，其中：

X1是D或E，X2是Y或W，X3是Q、H或N；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VL2為T-A-X1-X2-L-A-D，其中：