[發(fā)明專利]針對PCT的結合蛋白以及檢測PCT的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911307720.1
• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN113004404B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發(fā)明（設計）人: 崔鵬;何志強;孟媛;鐘冬梅;馬秋燕;覃婷;游輝
• 申請（專利權）人: 東莞市朋志生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/26
• 分類號: C07K16/26;G01N33/74;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發(fā)明公開了針對PCT的結合蛋白以及檢測PCT的方法，涉及抗體技術領域。本發(fā)明公開的針對PCT的結合蛋白其包括抗原結合結構域所述抗原結合結構域包括如下互補決定區(qū)中的至少一個：CDR?VH1：G?Y?X1?F?T?D?Y?X2?M?X3、CDR?VH2：G?X1?N?P?X2?N?G?G?X3?S?Y?N?Q?X4?F?K?G和CDR?VH3：X1?R?Y?P?X2?Y?Y?G?P?X3?Y?A?V。該結合蛋白可以特異性結合PCT，具有較好的結合活性和親和力，使用本發(fā)明的結合蛋白檢測PCT，可以提高檢測的靈敏度和特異性，為PCT的檢測以及為PCT作為標志物的疾病的診斷提供更多蛋白選擇。

技術領域

本發(fā)明涉及抗體技術領域，具體而言，涉及針對PCT的結合蛋白以及檢測PCT的方法。

背景技術

降鈣素原(英文名稱為procalcitonin，簡寫PCT)編碼基因定位于人類第11號染色體，該基因由6個外顯子和5個內(nèi)含子組成，總長7600bp，其中編碼區(qū)長度為2800bp，基因轉錄后在甲狀腺濾泡旁細胞粗面內(nèi)質網(wǎng)內(nèi)翻譯成降鈣素原前體，進而在內(nèi)源多肽酶的作用下修飾加工，生成116個氨基酸的終產(chǎn)物PCT。

在嚴重全身性細菌、真菌、寄生蟲、急性瘧疾感染、系統(tǒng)炎性反應綜合征(SIRS)、多器官功能衰竭綜合征(MODS)的診斷方面，PCT是一個具有高靈敏度、特異性的新指標。PCT主要是在細菌毒素和炎性細胞因子的刺激下產(chǎn)生，而在非感染性炎癥狀態(tài)下血清PCT一般不升高，感染性炎癥過程中，PCT的生成非常快，對內(nèi)毒素刺激反應2～6小時內(nèi)即升高，嚴重全身感染者血PCT在24h內(nèi)可高達1000倍。PCT作為一種新的感染性炎癥標記物目前已經(jīng)被廣泛認可。不僅能早期鑒別是否細菌感染，更是敗血癥的預警和診斷指標，且PCT與細菌感染的程度呈正相關，它的上升或下降直接反應疾病惡化或好轉的趨勢，因此，PCT的檢測在細菌性感染、敗血癥、MODS的鑒別診斷、預后判斷、療效觀察及合理指導應用抗菌藥等均有重要的參考價值。

PCT檢測炎癥的方法已獲得美國食品藥品管理局(FDA)的許可。早期，檢測PCT主要使用凝膠層析方法和高效液相色譜法，這兩種方法不僅費時，且操作要求高，不易自動化。近年來，PCT的檢測多才采用免疫學方法進行，具有特異性強、靈敏度高和容易操作等優(yōu)點，包括雙抗夾心免疫化學法、膠體金法和放射免疫法等。所有這些免疫學方法的前提都是制備針對PCT的特異性單克隆抗體，在健康人血漿中PCT含量極低，在0.2ng/mL以下，因此，對所制備抗體的親和力等參數(shù)要求很高。制備PCT特異性抗體，為PCT的免疫檢測提供關鍵原料，對擴大其臨床應用，降低醫(yī)療成本，具有重要意義。

目前國內(nèi)用于檢測PCT的單克隆抗體靈敏度、特異性以及親和力上都存在一些缺陷，還有較大的改善空間，因此，本領域針對檢測PCT的單克隆抗體的仍然存在著強烈需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供可特異性結合PCT的結合蛋白及其應用。本發(fā)明提供的結合蛋白可以特異性結合PCT，具有較好的結合活性和親和力，使用本發(fā)明的結合蛋白檢測PCT，可以提高檢測的靈敏度和特異性，該結合蛋白可以用于診斷以PCT作為標志物的疾病。

名詞定義

術語“結合蛋白”泛指包含CDR區(qū)的一切蛋白/蛋白片段，特別是抗體或抗體功能片段。“抗體”此用語包括多克隆抗體及單克隆抗體，“抗體功能片段”包括上述這些抗體的抗原化合物結合片段，包括Fab、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv、雙特異抗體和抗體最小識別單位，以及這些抗體和片段的單鏈衍生物。抗體的類型可以選擇IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD。此外，“抗體”此用語包括天然發(fā)生的抗體以及非天然發(fā)生的抗體，包括例如嵌合型(chimeric)、雙功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗體，以及相關的合成異構形式(isoforms)。“抗體”此用語可和“免疫球蛋白”互換使用。