[發明專利]用于診斷帕金森病的聯合標志物及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201911307000.5
• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN111024843B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 樂衛東;邵亞平;李天白;許國旺
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發明涉及血漿樣品中小分子代謝物咖啡因、肌酐、二十烯酰胺、苯乙酰谷氨酰胺、癸酸和吲哚乳酸，作為聯合標志物在制備用于診斷受試者中帕金森病患者的試劑盒中的新應用。本發明還涉及檢測受試者中的帕金森病患者的試劑盒，通過檢測來自受試者的血漿中上述聯合標志物各自的相對濃度，基于二元邏輯回歸方程計算所述聯合標志物變量，并基于確定的截點值，判斷所述受試者是否患有帕金森病。所述試劑盒可實現對本發明涉及的幾種代謝物的高靈敏檢測，并且具有檢測成本低、重復性好的特點。上述幾種小分子代謝物的聯合使用，可應用于輔助帕金森病的臨床診斷，具有較高的開發應用價值。

技術領域

本發明涉及一種新的小分子聯合標志物在帕金森病診斷中的應用，并且涉及檢測受試者中的帕金森病的檢測試劑盒和方法，屬于分析化學及臨床醫學及醫學領域。

背景技術

帕金森病(Parkinson's disease，PD)是第二常見的神經退行性疾病，多發于老年人群。隨著人口老齡化的加劇，PD的發病率日益升高。目前，PD的臨床診斷主要依據病史、臨床癥狀及對左旋多巴治療的反應，存在較高的漏診率和誤診率。由于PD的發病機制尚不明確，傳統的藥物治療只能暫時減輕或緩解癥狀，而不能有效阻止或逆轉PD的進程，并且長期用藥會相繼引起多種并發癥[參考文獻1：Oxenkrug G,Van dHM,Roeser J,SummergradP.Endocrinology DiabetesMetabolism Journal 2017；1]。因此，發現靈敏度高、特異性好的生物標志物對于改善PD的臨床診斷與治療具有重要意義。

目前不少學者已致力于PD生物標志物的研究，主要集中在臨床癥狀評價、功能神經影像學、遺傳和生化指標檢測等領域。由于臨床癥狀表現存在波動、不同患者間具有個體差異等原因，單純依靠臨床癥狀的診斷靈敏度和特異性較低。功能神經影像學主要有大腦PET/SPECT成像、磁共振成像和經顱超聲等技術，操作方便但購置設備費用昂貴、操作技術要求高、特異性有限，從而限制了其臨床應用。此外，90％～95％的PD患者都是散發的，家族性PD僅占5％～10％，因此，基因僅能解釋少數PD的發病原因[參考文獻2：Delenclos M,Jones DR,McLean PJ,Uitti RJ.ParkinsonismRelated Disorders 2016；22:S106-S10]。由于生化指標檢測創傷小、成本相對較低，成為PD生物標志物研究的熱點。體液特別是外周血具有取材方便、侵襲性小、再生速度快等優點，是生物標志物研究的理想來源之一。

針對PD的血液生物標志物，研究較多的有α-突觸核蛋白(α-Synuclein)、DJ-1、氧化應激相關因子(尿酸、谷胱甘肽、8-羥基脫氧鳥苷等)、炎癥因子和神經營養因子等。由于結果的不一致性和不同研究機構使用的檢測方法間存在較大的差異，目前臨床上尚無明確的PD生物標志物診斷的相關標準。相比基因和蛋白質的表達易受表觀遺傳和翻譯后修飾等生命過程的調控而具有存在形式的不均一和不確定性，代謝物作為上游基因表達的最終產物，其含量的變化可以反映生物體對基因或外界環境變化所做出的最終響應，因而更易于與生物表型相關聯。研究表明，PD的發生與神經遞質、磷脂、固醇和氨基酸等多條代謝通路的紊亂及線粒體功能異常密切相關，血液中氨基酸、脂質分子、神經遞質等多種小分子代謝物的含量在帕金森病患者和正常人之間存在顯著差異[參考文獻3：Zheng H,Zhao L,XiaH,Xu C,Wang D,Liu K,Lin L,Li X,Yan Z,Gao H.Molecular Neurobiology 2016；53:6690-7.]。本發明通過采用超高效液相色譜質譜聯用的代謝組學技術檢測血漿中的小分子代謝物，并結合生物信息學和統計學分析等手段篩選出目標差異代謝物，以期輔助帕金森病的臨床診斷。超高效液相色譜質譜聯用技術為小分子代謝物的檢測提供了快速、高靈敏、低成本、高穩定性的檢測方法。