[發(fā)明專(zhuān)利]凈化污水水體的個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911306813.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113005210A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹星;任淑媛;吳欣圓;徐新燕;孫子茜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京堯玥生物科技有限公司;銀川堯玥生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/689
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/689;C12Q1/04;C12N1/20;C12N1/16
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑凈化污水菌劑配方的制備方法，包括以下步驟(詳見(jiàn)本公司專(zhuān)利：CN109988725A)：

(1)根據(jù)權(quán)利1要求所訴的個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑凈化污水菌劑配方的制備方法其特點(diǎn)在于，首先要對(duì)凈化污水水體樣本進(jìn)行檢測(cè)以及處理，其次要對(duì)其中的微生物DNA進(jìn)行抽提。為此本公司采用高尖端檢測(cè)技術(shù)，用515F/806R PCR引物對(duì)微生物DNA的16S rRNA基因的V4高變區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增。再其次本公司要測(cè)定其菌群含量，主要步驟為：先把樣本中微生物的總DNA提取出來(lái)，然后以16S rRNA作為目標(biāo)序列，本公司用515F/806R PCR引物對(duì)其進(jìn)行最終絕對(duì)定量。

(2)根據(jù)權(quán)利1要求所訴的個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑凈化污水菌劑配方的制備方法其特點(diǎn)在于，本公司要測(cè)定樣本中不同微生物菌群比例，其為主要步驟之一。首先本公司要測(cè)序擴(kuò)增的產(chǎn)物通過(guò)使用高通量基因測(cè)序技術(shù)進(jìn)行。其次本公司對(duì)其分析評(píng)估，是檢測(cè)測(cè)序結(jié)果更具有價(jià)值。然后本公司要把之前經(jīng)過(guò)檢測(cè)得出的測(cè)序結(jié)果與16S rRNA的微生物基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，以此來(lái)確定我們檢測(cè)的樣本中不同活性微生物菌群的相對(duì)含量和比例。之后本公司需要確定針對(duì)樣本進(jìn)行凈化的菌劑的配方，其特點(diǎn)在于：首先我們要把之前將測(cè)定出的微生物菌群含量與該污水水體微生物數(shù)據(jù)庫(kù)中該微生物菌群的含量分布進(jìn)行比對(duì)，若其比對(duì)結(jié)果得出相對(duì)含量≤25％，則提供的菌劑配方中該微生物菌群的活性含量不低于5×10⁷cfu/g(mL)；若其比對(duì)結(jié)果得出相對(duì)含量＞25％，則提供的菌劑配方中該微生物菌群的活性含量不低于1×10⁷cfu/g(mL)；

(3)根據(jù)權(quán)利1要求所訴的個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑凈化污水菌劑配方的制備方法其特點(diǎn)在于，本公司針對(duì)如何凈化污水水體菌種發(fā)酵步驟如下：其重點(diǎn)在于將步驟(2)中確定的菌劑配方與發(fā)酵基質(zhì)進(jìn)行混合發(fā)酵，當(dāng)發(fā)酵基質(zhì)的pH值到達(dá)或接近5.0時(shí)，則發(fā)酵成熟。

2.個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑凈化污水水體所需要的系統(tǒng),其特征在于,所述系統(tǒng)的為儲(chǔ)備污水水體的水庫(kù),進(jìn)水處為水庫(kù)一端,出水處一端為小出水口:水庫(kù)采用蓄水減排的模式,增加蓄持時(shí)間,確保菌體、代謝物和污染物復(fù)合體被系統(tǒng)中微生物所截留。

3.根據(jù)權(quán)利1要求所訴的個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑凈化污水菌劑配方的制備方法其特點(diǎn)在于：把515F-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA，806R-GGACTACHVGGGTWTCTAAT作為采用515F/806R PCR的引物。

4.根據(jù)權(quán)利1要求所訴的個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑凈化污水菌劑配方的制備方法其特點(diǎn)在于：通過(guò)選擇污水水體樣本中常見(jiàn)多種菌株16S rRNA的微生物基因序列的測(cè)定，參照本公司自主總結(jié)以及開(kāi)發(fā)的數(shù)據(jù)庫(kù)菌株的系統(tǒng)分類(lèi)名稱(chēng)和DNA序列信息，來(lái)構(gòu)建具有本公司自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的水體生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)分析和管理平臺(tái)的方法。凈化污水水體微生態(tài)個(gè)性化菌劑配方的微生物菌種，包含芽孢菌、酵母菌、放線菌、光合細(xì)菌等相關(guān)一系列微生物菌種。以及我們16S rRNA的微生物基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建方法是通過(guò)運(yùn)用具有本公司自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的水體生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)選擇及確定污水水體樣本中常見(jiàn)幾百種菌株的名稱(chēng)和其約1.8kb大小的16SrRNA基因的DNA序列。數(shù)據(jù)庫(kù)中包括菌株的詳細(xì)系統(tǒng)分類(lèi)名稱(chēng)和DNA序列信息。以及某一種族的大量污水水體樣本中微生物組成分布比例信息是本公司通過(guò)高通量測(cè)序方法獲得。

5.根據(jù)權(quán)利1要求所訴的個(gè)性化活性復(fù)合微生物菌劑凈化污水菌劑配方的制備方法其特點(diǎn)在于：根據(jù)上述步驟確定其需要菌種來(lái)接著確定其發(fā)酵基質(zhì)。在其菌種所需要的適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵生產(chǎn)的條件發(fā)酵。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種凈化污水水體微生態(tài)個(gè)性化菌劑配方的制定方法，其特征在于：發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵液混勻，濃縮，離心，過(guò)濾，冷卻，檢測(cè)，調(diào)配后得到液態(tài)的凈化污水水體微生態(tài)產(chǎn)品；貯藏在無(wú)陽(yáng)光直射、陰涼通風(fēng)處。