[發明專利]表達犬瘟熱病毒結構蛋白的重組狂犬病病毒及其應用

在審

• 申請號: 201911303676.7
• 申請日: 2019-12-17
• 公開（公告）號: CN110951699A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 夏振強;金宏麗;石晶;劉迪;殷玉和;焦翠翠;趙健;盧繼龍;劉彥超
• 申請（專利權）人: 長春西諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C07K14/13;A61K39/295;A61K39/175;A61K39/205;A61P31/14
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發明提供一種表達犬瘟熱病毒結構蛋白的重組狂犬病病毒及其應用。所述重組狂犬病病毒是以狂犬病病毒SRV9株為骨架，將犬瘟熱病毒H基因以及犬瘟熱病毒F基因分別插入狂犬病病毒SRV9cDNA全長的P基因和M基因之間，或者N基因與P基因之間，或者M基因與G基因之間，或者G基因與L基因之間，最后通過反向遺傳操作技術拯救分別獲得重組狂犬病病毒株SRV9?CDVH和SRV9?CDVF。將所制備的重組病毒滅活后，輔以佐劑制得表達犬瘟熱病毒結構蛋白的重組狂犬病病毒滅活疫苗，免疫動物后能誘導產生相應的狂犬及犬瘟熱抗體效價。本發明制備的疫苗具有理想的免疫原性、安全性高的優點。

技術領域

本發明涉及基因工程、免疫學及獸醫生物制藥領域，具體地說，涉及一種表達犬瘟熱病毒結構蛋白的重組狂犬病病毒及其應用。

背景技術

犬瘟熱(canine distemp,CD)是由犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus,CDV)感染引起的急性、高度接觸性傳染病，是當前對我國養犬業、毛皮動物養殖業和野生動物保護業危害最大的疫病之一。該病不但可以感染犬科動物，還可以感染鼬科、浣熊科和貓科等多種動物，發病率極高，幾乎可以達到100％，且臨床癥狀多樣，容易發生細菌、病毒的混合感染和繼發二次感染，死亡率更是可高達80％。犬瘟熱病毒屬于副粘病毒科(Paramyxoviridae)，副粘病毒亞科(Paramyxovirinae)，麻疹病毒屬(Morbillivirus)，為不分節段的單負鏈RNA病毒，粒子直徑約為110-550nm，其基因組長15690bp，編碼N、P、M、F、H、L和C蛋白。其中，融合蛋白(fusion protein，F)，是受體結合蛋白，位于CDV囊膜上的I型糖蛋白，在病毒的感染、擴散環節中起到關鍵作用。附著或血凝素蛋白(attachmentprotein or hemagglutinin protein,H或HA)，是CDV囊膜表面上典型的II型糖蛋白，包括胞外結構域、跨膜區以及胞質尾區，胞外結構域位于C端，胞質尾區位于N端。F蛋白可誘導機體產生中和抗體，是抗犬瘟熱病毒免疫的主要抗原，抗犬瘟熱病毒H蛋白的單克隆抗體具有病毒中和活性，對試驗鼠的保護力強于抗F蛋白的單克隆抗體。F、H是產生中和抗體的重要抗原之一，在病毒免疫中占有重要地位，只有F和H蛋白共同作用才能使病毒進入宿主細胞內。研究發現雖然針對F蛋白的單抗不能完全中和CDV，但其誘導的免疫反應能阻止病毒感染，并且在有病毒增殖的情況下可抑制癥狀的發生。病毒能夠通過H蛋白吸附到細胞表面的受體上，因此，H蛋白決定了犬瘟熱病毒宿主的特異性，并協助F蛋白使犬瘟熱病毒以囊膜與宿主細胞膜發生融合的方式進入宿主細胞。多年來，幼犬主要通過接種犬瘟熱弱毒苗進行免疫，但由于易受母源抗體干擾及存在熱穩定性差等缺陷，常常導致免疫失敗。而滅活疫苗不受血液循環抗體影響，即使血液中有抗體存在也可以接種，它在體內不能復制，可以用于免疫缺陷者。

狂犬病俗稱“恐水癥”，是由狂犬病病毒(Rabies,RABV)引起的高致死性人獸共患傳染病。病毒侵入機體的中樞神經系統，引起急性致死性腦脊髓炎，其臨床癥狀最初為感冒、發熱、頭痛，很快就會出現幻覺，其特點是潛伏期長，一旦發病，致死率近乎100％。幾乎所有的溫血動物和人都易感，主要動物包括犬、貓、浣熊、臭鼬、蝙蝠和狐貍等，可由患病動物傳染至人。人或動物可通過以下途徑感染狂犬病：咬傷、氣溶膠傳播、人類器官移植，其中咬傷是主要傳播途徑。目前為止尚無特效的治療藥物，最為有效的辦法是通過注射狂犬病疫苗進行預防。盡管許多國家已經對犬和野生動物進行全面免疫，但仍未完全控制此病。

負鏈RNA病毒的反向遺傳操作(Reverse genetic)是通過操作病毒基因組cDNA制造新病毒的過程。對基因組cDNA進行突變、缺失或外源基因插入修飾后，通過反向遺傳操作系統可獲得相應的突變或重組的負鏈RNA病毒。基于已經建立狂犬病病毒SRV9株的反向遺傳系統，為進一步開展狂犬病病毒載體疫苗研制奠定了堅實的基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種表達犬瘟熱病毒結構蛋白的重組狂犬病病毒及其應用。