[發(fā)明專利]用于檢測(cè)視神經(jīng)脊髓炎的miRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911302643.0
• 申請(qǐng)日: 2019-12-17
• 公開（公告）號(hào): CN111004846A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱偉;彭立勝;陳晨;孫曉渤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 朱雙;劉明星

本發(fā)明公開了用于檢測(cè)視神經(jīng)脊髓炎的miRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用。本發(fā)明開發(fā)了對(duì)視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病具有臨床診斷潛能及預(yù)測(cè)預(yù)后能力的血清外泌體miRNA標(biāo)志物hsa?miR?122?3p和hsa?miR?200a?5p，證實(shí)了這兩個(gè)miRNA作為診斷視神經(jīng)脊髓炎和預(yù)測(cè)嚴(yán)重程度的無(wú)創(chuàng)標(biāo)志物具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)及神經(jīng)病學(xué)領(lǐng)域，涉及用于檢測(cè)視神經(jīng)脊髓炎的miRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

視神經(jīng)脊髓炎光譜疾病(NMOSD)和多發(fā)性硬化癥(MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥性脫髓鞘疾病，具有高復(fù)發(fā)、高致殘的特點(diǎn)。NMOSD以前被認(rèn)為是MS的亞型，二者具有相似的臨床表現(xiàn)，例如視神經(jīng)炎和急性脊髓炎。全球范圍內(nèi)，NMOSD的患病率較為接近，約(1～5)/(10萬(wàn)人·每年)，但在非白種人群(如亞洲人群)中更為易感。NMOSD和MS具有不同的發(fā)病率，且中西方比例差異明顯。NMOSD：MS比例上，白種人約為1:100，非白種人約為40:60。二者臨床表現(xiàn)具有很大的相似性，極易診斷錯(cuò)誤。直到發(fā)現(xiàn)了針對(duì)水通道蛋白4的免疫球蛋白G抗體(AQP4-IgG)，才將二者歸為獨(dú)立的疾病。AQP4-IgG被認(rèn)為是NMOSD高度特異性的生物標(biāo)志物，并且在80％以上的NMOSD患者血清學(xué)檢測(cè)為陽(yáng)性。水通道蛋白4表達(dá)在整個(gè)CNS，主要在星形膠質(zhì)細(xì)胞的終末期過(guò)程中表達(dá)。AQP4-IgG靶向aquaporin-4，在初始階段誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷，在后期則誘導(dǎo)髓鞘損傷和軸突丟失。MS的發(fā)病機(jī)制很復(fù)雜，T和B細(xì)胞對(duì)髓磷脂抗原的自身反應(yīng)起重要作用。盡管AQP4-IgG測(cè)試和磁共振成像可以幫助診斷NMOSD和MS，但仍需要探索其他可靠的生物標(biāo)志物。

MicroRNA(miRNA)是一類短的非編碼RNA，長(zhǎng)度約為18至25個(gè)核苷酸。MiRNA通過(guò)抑制其靶向mRNA的表達(dá)來(lái)完成重要的生物學(xué)功能，在臨床實(shí)踐中證實(shí)miRNA可以成為新型的疾病診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物。最近使用下一代測(cè)序技術(shù)(NGS)進(jìn)行的研究表明，NMOSD中循環(huán)的miRNA可能允許其與MS區(qū)分。在最近的幾十年中證實(shí)外泌體具有選擇性的細(xì)胞與細(xì)胞間通信，參與重要的生物學(xué)調(diào)控。外泌體是直徑為30-120nm的納米囊泡，形成于細(xì)胞質(zhì)中，幾乎所有細(xì)胞都可以分泌。外泌體根據(jù)來(lái)源的細(xì)胞而異，在血清和其他體液體中相對(duì)容易檢測(cè)到。研究已經(jīng)表明，外泌體可以穿透血腦屏障，并參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多種生理和病理功能。外泌體的生物學(xué)功能主要取決于其內(nèi)部成分，例如miRNA，lncRNA和蛋白質(zhì)。目前已經(jīng)證實(shí)外泌體傳遞的miRNA在外泌體細(xì)胞間通訊中起重要作用。最近的一項(xiàng)研究表明復(fù)發(fā)緩解型MS(RRMS)患者的外泌體miRNA表達(dá)異常。hsa-miR-122-5p，hsa-miR-196b-5p，hsa-miR-301a-3p和hsa-miR-532-5p的水平與RRMS嚴(yán)重程度密切相關(guān)。但是，尚未在NMOSD患者研究外泌體miRNA譜。若能找到對(duì)NMOSD具有潛在診斷價(jià)值的血清miRNA并根據(jù)這類miRNA設(shè)計(jì)針對(duì)于NMOSD的診斷試劑盒，將會(huì)推動(dòng)我國(guó)NMOSD的診治水平，也為將來(lái)對(duì)NMOSD的進(jìn)一步研究提供思路。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供用于檢測(cè)視神經(jīng)脊髓炎的miRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用。

本發(fā)明利用NGS以及基于qRT-PCR的方法，通過(guò)對(duì)大樣本的NMOSD血清外泌體miRNA的研究，找到對(duì)NMOSD具有診斷價(jià)值的血清miRNA；并對(duì)這些miRNA在NMOSD血清外泌體中的表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步明確其與NMOSD的關(guān)系；同時(shí)也研究了這些血清miRNA在預(yù)測(cè)患者病情嚴(yán)重程度中的作用。

因此，本發(fā)明的目的是提供miRNA標(biāo)志物在制備視神經(jīng)脊髓炎的診斷制劑中的應(yīng)用，所述的miRNA標(biāo)志物為hsa-miR-122-3p、hsa-miR-200a-5p中的至少一種。

優(yōu)選，所述的應(yīng)用，是檢測(cè)血清外泌體樣本中miRNA標(biāo)志物的表達(dá)水平的試劑在制備視神經(jīng)脊髓炎的診斷制劑中的應(yīng)用。

優(yōu)選，所述的應(yīng)用，是采用測(cè)序技術(shù)、核酸雜交技術(shù)或核酸擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)樣本中miRNA標(biāo)志物的表達(dá)水平。