[發明專利]用于熒光定量PCR檢測ALDH2基因多態性的方法

在審

• 申請號: 201911299216.1
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN110819708A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 馮薇;翟瑞雪;智慧芳;倪君君
• 申請（專利權）人: 北京和合醫學診斷技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司 11241
• 代理人: 解政文

1.一種用于熒光定量PCR檢測ALDH2基因多態性的引物探針組合，其特征在于，所述引物探針的核苷酸序列：上游引物由SEQ ID NO.1所示，下游引物由SEQ ID NO.2所示，熒光探針1由SEQ ID NO.3所示，熒光探針2由SEQ ID NO.4所示。

2.根據權利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述ALDH2基因多態性包括ALDH2基因的ALDH2*2位點。

3.根據權利要求1或2所述的引物探針組合，其特征在于，所述熒光探針在5′末端區域標記有熒光基團，在3′末端區域標記有淬滅基團，熒光探針1和熒光探針2的熒光基團均不相同。

4.根據權利要求3所述的引物探針組合，其特征在于，所述熒光基團選自FAM、TET、VIC、ROX、Texas Red-X、Cy3、Cy5；淬滅基團選自TAMRA、BHQ、DABCYL、NFQ-MGB。

5.根據權利要求3或4所述的引物探針組合，其特征在于，所述熒光探針1的5′端標記有FAM的熒光基團，熒光探針2的5′端標記有VIC熒光基團，所有熒光探針的3′端均標記有NFQ-MGB的淬滅基團。

6.權利要求1-5任一項所述的引物探針組合在制備用于熒光定量PCR檢測ALDH2基因多態性的試劑盒中的應用。

7.一種用于熒光定量PCR檢測ALDH2基因多態性的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1-5任一項所述的引物探針組合。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包含DNA聚合酶、緩沖液、尿嘧啶DNA糖基酶、dNTPs和超純水。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，還包含待測樣品DNA提取試劑或DNA提取試劑盒。

10.一種用于熒光定量PCR檢測ALDH2基因多態性的檢測方法，其特征在于，采用權利要求1-5任一項所述的引物探針組合對待測樣品進行熒光定量PCR檢測，包括步驟：

(1)從待測樣品中提取基因組DNA，作為擴增模板；

(2)配制包含所述引物探針組合和所述擴增模板的熒光定量PCR反應體系，上游引物和下游引物的終濃度均為0.2-1.0μM；熒光探針的終濃度均為0.05-0.5μM；

(3)熒光PCR擴增反應，條件：94-98℃，預變性，5-15min；94-98℃變性10-60s；60-70℃，退火60-90s；68-72℃，延伸15-300s；30-50個循環；

(4)擴增完成后，根據散點圖自動讀取基因型，每個點代表一個樣品，每個數據集代表一種基因型：野生型：*1/*1GG；雜合突變型：*1/*2GA；純合突變型：*2/*2AA；空白對照：NTC。