[發明專利]創制水稻高直鏈淀粉型新種質的方法及其應用

有效

• 申請號: 201911298672.4
• 申請日: 2019-12-17
• 公開（公告）號: CN112980839B
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發明（設計）人: 丁琦;劉行丹;王文舒;徐念;魏晶;吳曉;李銀龍;馬崇烈
• 申請（專利權）人: 中國種子集團有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;C12N15/29;A01H5/10;A01H6/46
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.創制水稻高直鏈淀粉型新種質的方法，其包括修飾水稻中的OsWaxy基因，使其轉錄活性增強，其中所述修飾通過CRISPR/Cas9進行，所述CRISPR/Cas9包含Cas9、第一導向RNA（sgRNA）和第二sgRNA，其中所述第一sgRNA靶向SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，并且所述第二sgRNA靶向SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述OsWaxy基因包含以下序列或由以下序列組成：SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列，或者編碼SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述水稻為秈稻或粳稻。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述Cas9包含SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，并且所述第一sgRNA包含SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，并且所述第二sgRNA包含SEQ IDNO:6所示的核苷酸序列。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述修飾導致OsWaxy基因的第一內含子完全缺失。

6.通過權利要求1-5中任一項所述的方法創制的水稻用于育種的用途。

7.通過權利要求1-5中任一項所述的方法創制的水稻用于改良種質資源的用途。

8.由權利要求1-5中任一項的方法獲得的水稻的種子制成的制品，其選自食品、飲品、飼料或工業原料。

9.創制水稻高直鏈淀粉型新種質的方法，其包括將CRISPR/Cas9編輯載體導入含有OsWaxy基因的水稻中，所述CRISPR/Cas9編輯載體包含表達Cas9的第一表達盒、表達第一sgRNA的第二表達盒和表達第二sgRNA的第三表達盒，其中所述Cas9包含SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，所述第一sgRNA包含SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，并且所述第二sgRNA包含SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。

10.如權利要求9所述的方法，其中所述OsWaxy基因包含以下序列或由以下序列組成：SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列，或者編碼SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

11.如權利要求9或10所述的方法，其中所述水稻為秈稻或粳稻。