[發明專利]春蘭miR390b在控制植物營養器官發育中的應用

有效

• 申請號: 201911293790.6
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN111304198B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 胡鳳榮;劉倩;徐子涵
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 王翠翠

本發明公開了一種春蘭miR390b基因及其在控制植物營養器官發育中的應用。本發明從春蘭栽培品種“宋梅”中獲得miR390b的前體序列片段編碼基因，并在春蘭中進行表達分析，隨后將其構建至過表達載體導入目的植物中驗證其功能，發現過表達miR390b基因的擬南芥植株出現童期縮短，部分頂端優勢減弱，側枝生長茂盛，側枝下葉片數量增多等表型，可見該基因在蘭花及其它園藝植物生產、育種中將有廣泛的用途。

技術領域

本發明涉及植物基因工程技術領域，具體涉及一種春蘭非編碼RNA（核糖核酸）miR390b在控制植物營養器官發育中的應用。

背景技術

蘭科（Orchidaceae）是開花植物中最大科之一，全世界有25000多種，約占所有開花植物的10%。春蘭（Cymbidium goeringii）屬于蘭科蘭屬中的小花型地生蘭種類，其花型奇特、花色淡雅，花香清幽，葉姿優美，觀賞價值和經濟價值極高。但春蘭從幼苗到開花所需要的時間較長，野生春蘭實生苗需十年左右方可開花，人工組培苗在養護得當的情況下也需至少三年才能開花。因此，研究基因影響植物營養器官發育的分子機制對春蘭育種、生產及應用具有重要意義。而miR390在植物營養器官發育方面具有重要作用，可為植物的遺傳改良提供重要依據。

MicroRNA390s（miR390s）是植物microRNAs中較為保守的古老家族之一，可參與多種植物生理過程，目前在其對植物生長發育方面的研究更多一些，包括植物側生器官極性的形成、花器官形成及果實形成等。例如，油菜花的miR390參與了其早期胚胎的發育。研究表明，miR390一般通過影響生長素信號來參與調控植物的生長發育過程。如，擬南芥At miR390能通過抑制ARF3和ARF4轉錄因子來延長幼年期推遲開花，從而間接調控花期。

目前關于miR390對營養器官發育的影響，已報道的有，過表達擬南芥miR390會令其葉片極性發生變化，這可能是對生長素或細胞分裂素相關基因的表達產生影響所致。Os miR390前體基因的過表達可導致水稻出現頂端分生組織異常及營養階段發育遲緩等表型缺陷，此外，還可導致其分蘗數增加。但miR390控制春蘭營養器官發育的機制尚不明確，因此，利用基因工程技術，將從春蘭中克隆獲得miR390b前體基因轉入其它植物中，對于研究其功能具有重要意義，同時極具應用前景。

發明內容

本發明提供了一種春蘭miR390b在控制植物營養器官發育中的應用。

一種春蘭miR390b在控制植物營養器官發育中的應用，所述植物miR390b的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

優選的，所述植物為春蘭。

具體方法為：將包含所述春蘭miR390b的前體基因連接到載體上，通過農桿菌介導轉化到野生型擬南芥“哥倫比亞”，篩選，培養，獲得轉基因植株。

由于miRNA本身很短，只有20bp左右，而前體基因相比較稍長一些，將其連接到載體上有利于擬南芥轉化的實現，優選的，所述前體基因的序列如SEQ ID NO.3或SEQ IDNO.4所示。