[發明專利]K-ras基因突變位點檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201911293559.7
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN110835644B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 王建平
• 申請（專利權）人: 廣州市寶創生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6827
• 分類號: C12Q1/6827;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

本發明涉及分子生物技術和基因檢測領域，具體而言，涉及一種K?ras基因突變位點檢測試劑盒，該試劑盒包括：a)引物對；b)上游探針、下游探針、發夾探針；以及c)兩種納米金探針。上述引物和探針能夠實現在閉管條件下對K?ras基因的突變位點進行高靈敏、高分辨、低成本檢測，能夠有效的避免擴增產物的交叉污染。其中下游探針既可單獨使用，也可互相配合在同一反應體系下進行多重檢測，因而本試劑盒能夠對最多七種K?ras基因突變位點同時進行檢測，檢測效率更高。

技術領域

本發明涉及分子生物技術和基因檢測領域，具體而言，涉及一種K-ras基因突變位點檢測試劑盒。

背景技術

K-ras是EGFR信號通路下游的一種小分子G蛋白，突變后抑制了自身的GTP酶活性，使得K-ras蛋白總是處于活化狀態，導致信號通路不受上游EGFR信號指令的調控。結直腸癌患者中K-ras基因的突變率約為40％，70％發生于第12位密碼子，30％發生于13位密碼子。K-ras基因突變狀態與西妥昔單抗療效相關，K-ras基因發生突變時西妥昔單抗治療無效，因此，針對K-ras基因突變進行分子分型檢測，針對其突變情況制定給藥方案具有十分必要性。然而通常情況下，在實際臨床樣本中，突變基因通常混在大量野生型基因序列中，而由于兩者之間的序列常常僅有一個堿基的差異，因此針對性的檢測突變基因的難度很大。基于此，目前針對這類的基因位點檢測多是基于特異性較高的分子檢測方法完成，使用較多的技術平臺是ARMS技術和NGS技術，這兩種方法均能夠檢測低至1％左右的基因突變，但是由于試劑盒的成本較高(或者對操作者的要求較高)，給患者帶來較大的經濟負擔。

發明內容

本發明通過納米金探針與模板雜交與否會引起特征吸收波長發生規律性變化來實現突變位點的檢測，由于不需要昂貴的機器，也不需要復雜的操作，是一種較現有方法更為快速簡單經濟的K-ras基因突變檢測方法。

具體的，本發明涉及一種K-ras基因突變位點檢測試劑盒，包括：

a)SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物對；

b)SEQ ID NO：3所示的上游探針、SEQ ID NO：4～10所示的下游探針中的至少一條、SEQ ID NO：11所示的發夾探針；以及

c)兩種納米金探針，其各自包含SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示核酸片段。

上述引物和探針能夠實現在閉管條件下對K-ras基因的突變位點進行高靈敏、高分辨、低成本檢測，能夠有效的避免擴增產物的交叉污染。其中下游探針既可單獨使用，也可互相配合在同一反應體系下進行多重檢測，因而本試劑盒能夠對最多七種K-ras基因突變位點同時進行檢測，檢測效率更高。

根據本發明的再一方面，還涉及一種組合物，其由如上所述的K-ras基因突變位點檢測試劑盒混合配制得到。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發明的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發明所提供試劑盒的使用原理示意圖；

圖2為本發明一個實施例中K-ras基因七種突變位點獨立檢測結果；

圖3為本發明一個實施例中K-ras基因七種突變位點同管多重檢測結果；

圖4為本發明一個實施例中K-ras基因突變位點檢測試劑在模板用量為3×10⁴拷貝下的靈敏度檢測結果；

圖5為本發明一個實施例中K-ras基因突變位點檢測試劑在模板用量為3×10³拷貝下的靈敏度檢測結果；