[發明專利]一種用于快速固定嗜熱四膜蟲細胞計數的試劑及其計數方法

在審

• 申請號: 201911291709.0
• 申請日: 2019-12-16
• 公開（公告）號: CN111088313A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 潘厚軍;常藕琴;石存斌;付小哲;王英英
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 深圳市創富知識產權代理有限公司 44367
• 代理人: 涂柳曉

本發明為一種用于快速固定嗜熱四膜蟲細胞計數的試劑，所述試劑為乙醇的水溶液。本發明的有益效果在于，固定嗜熱四膜蟲細胞時間迅速，5min即可完全固定，特別是試劑無色，對儀器無污染。75％乙醇溶液為常規消毒試劑，對人體較安全。

技術領域

本發明涉及水產養殖領域，具體涉及一種用于快速固定嗜熱四膜 蟲細胞計數的試劑及其計數方法。

背景技術

嗜熱四膜蟲(Tetrahymena thermophila)：隸屬于原生動物門中 的纖毛亞門、寡膜綱、膜口目、四膜科、四膜蟲屬，是營自由生活、 可大量人工純化培養的纖毛類原生動物。作為單細胞、可運動的、在 自然水體中常見、可大量人工純化培養、個體相對大(約50μm長,20 μm寬)的無細胞壁的真核細胞，以嗜熱四膜蟲為實驗對象進行細胞 和分子生物學研究已歷時50余年，并取得了一系列突破性的成果， 如肌動蛋白的發現、獲得1989年獲諾貝爾化學獎的核酶的發現、獲 2009年諾貝爾生理學和醫學獎的端粒結構的闡明(Blackburn,1978) 及端粒酶的發現(Greider，1985)、組蛋白翻譯后修飾功能的發現 (Brownell，1996)等。由于其遺傳背景清晰，大核基因組信息已經 獲悉，與魚類車輪蟲、小瓜蟲等纖毛類寄生蟲分類地位相近，近年來 作為纖毛類寄生蟲的替代模式生物，在藥物篩選和疫苗研究中的作用 受到了研究者的關注。

嗜熱四膜蟲作為模式生物，無論在細胞生物學、分子生物學的 理論機理研究，還是作為替代實驗對象進行疫苗或藥物的篩選研究， 都需要進行培養達到一定的密度，即在一定的體積下達到一定的數量。 細胞計數是一項基本的實驗技術或實驗過程中的重要步驟。

因為嗜熱四膜蟲是活動的，而且個體較小，在較低倍顯微鏡或細 胞計數儀下(放大至50～200倍)才能觀察計數，因而在計數前需要 固定或滅活。以往用于嗜熱四膜蟲滅活或固定劑主要是：臺盼藍、碘 液。臺盼藍是一種染色液，廣泛應用于活細胞計數，臺盼藍只進入胞 膜損傷的細胞，活細胞可以將這種染料排除在外，這樣數未染色的細 胞就是活細胞數目。碘液的配置方法可用魯哥氏碘液，碘片1.0g、 碘化鉀2.0g、蒸餾水300mL，先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘 片溶解在碘化鉀溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。魯哥氏碘液呈 黃色。

上述兩種用于嗜熱四膜蟲計數的試劑主要缺點如下：

1、臺盼藍是一種染料，呈藍色，容易污染儀器，另一個缺點是 細胞容易成團，往往造成計數結果的偏差。

2、碘液是一種含有碘化鉀的溶液，是一種黃色輕微刺激性氣味 的液體，同樣有顏色容易污染儀器，并且由于碘液能夠被人體皮膚吸 收,對皮膚和黏膜造成強烈的腐蝕作用，因而也不是一種理想的試劑。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明旨在提供一種用于快速固定嗜熱四 膜蟲細胞計數的試劑及其計數方法，具體的說，本發明所采用的計數 試劑是無顏色、無污染、對人體相對安全的試劑，可用于快速固定嗜 熱四膜蟲細胞用于計數。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種用于快速固定嗜熱四膜蟲細胞計數的試劑，所述試劑為乙醇 的水溶液。

優選地，所述乙醇的水溶液中乙醇的濃度為60％～90％。

優選地，所述乙醇的水溶液中乙醇的濃度為65％～85％。

優選地，混合時，所述乙醇的水溶液與嗜熱四膜蟲溶液體積相同

一種用于快速滅活嗜熱四膜蟲細胞計數的試劑的計數方法，所述 方法包括：

S1用移液槍吸取所需體積待測密度的嗜熱四膜蟲溶液于滅菌的 離心管中；

S2向所述離心管中加入同等體積的試劑；