[發(fā)明專利]一種斑馬魚(yú)胚胎全氟化合物內(nèi)暴露模型的構(gòu)建方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911291270.1
• 申請(qǐng)日: 2019-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111040990A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅茜;傅磊;李芳;陳志宇;李文波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): C12N5/073
• 分類號(hào): C12N5/073;C12Q1/02
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 熊永強(qiáng);陳聰

1.一種斑馬魚(yú)胚胎全氟化合物內(nèi)暴露模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

搭建顯微注射系統(tǒng)平臺(tái)；

配制含全氟化合物的樣品溶液，所述全氟化合物包括全氟羧酸類化合物和全氟磺酸類化合物中的一種或多種；

選取處于卵裂期的斑馬魚(yú)胚胎，利用所述顯微注射系統(tǒng)平臺(tái)，將所述樣品溶液注射至所述斑馬魚(yú)胚胎的植物極內(nèi)。

2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述顯微注射系統(tǒng)平臺(tái)包括：拉針儀、持針器、顯微操縱器、顯微注射器和體視顯微鏡；其中，所述拉針儀用于將毛細(xì)管拉制成注射針；所述持針器用于固定所述注射針；所述顯微操縱器用于調(diào)控所述注射針在顯微注射過(guò)程中位置；所述顯微注射器用于給所述注射針施加注射壓，以將所述待測(cè)樣品溶液注射至所述斑馬魚(yú)胚胎內(nèi)；所述體視顯微鏡用于在顯微注射過(guò)程中觀察和聚焦所述注射針及所述斑馬魚(yú)胚胎。

3.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述全氟羧酸類化合物包括全氟丁酸、全氟戊酸、全氟己酸、全氟庚酸、全氟辛酸、全氟壬酸、全氟癸酸、全氟十一酸、全氟十二酸、全氟十三酸、全氟十四酸、全氟十六酸和全氟十八酸中的一種或多種；所述全氟磺酸類化合物包括全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸、全氟辛烷磺酸和全氟癸烷磺酸中的一種或多種。

4.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述配制含全氟化合物的樣品溶液的過(guò)程包括：稱取全氟化合物固體粉末，然后加入去離子水，混合溶解后得到所述含全氟化合物的樣品溶液。

5.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述待測(cè)樣品溶液的注射劑量體積小于或等于所述斑馬魚(yú)胚胎體積的10％。

6.如權(quán)利要求1或5所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述斑馬魚(yú)胚胎的植物極內(nèi)，所述全氟化合物的注射質(zhì)量為0.1ng-50ng。

7.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述選取處于卵裂期的斑馬魚(yú)胚胎的過(guò)程包括：按照雌:雄為(1-2):1的比例將成年斑馬魚(yú)放置于配種缸內(nèi)，混合并讓所述成年斑馬魚(yú)進(jìn)行交配，然后收集所述配種缸底部的魚(yú)卵，經(jīng)分選、洗凈后獲得卵裂期的斑馬魚(yú)胚胎，將所述卵裂期的斑馬魚(yú)胚胎置于平板培養(yǎng)皿中，并清除所述平板培養(yǎng)皿內(nèi)的其他異物和水。

8.一種全氟化合物胚胎發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，包括：按如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述斑馬魚(yú)胚胎全氟化合物內(nèi)暴露模型的構(gòu)建方法構(gòu)建斑馬魚(yú)胚胎全氟化合物內(nèi)暴露模型，然后將經(jīng)注射后的所述斑馬魚(yú)胚胎轉(zhuǎn)移至養(yǎng)殖水中恒溫培養(yǎng)，觀察和記錄所述斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育過(guò)程中形態(tài)學(xué)變化。

9.如權(quán)利要求8所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，所述觀察和記錄所述斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育過(guò)程中形態(tài)學(xué)變化的過(guò)程包括：觀察所述斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育過(guò)程，并記錄所述斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育過(guò)程中的死亡率和畸形率。

10.如權(quán)利要求8所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，配制不同溶度梯度的所述含全氟化合物的樣品溶液，分別將不同溶度梯度的所述樣品溶液注射至各自對(duì)應(yīng)的斑馬魚(yú)胚胎的植物極內(nèi)。