[發(fā)明專利]一種抗PD-L1單克隆抗體以及在制備抗癌藥物方面的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911288345.0
• 申請(qǐng)日: 2019-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN111018989B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張守濤;郭亞楠;萬騏鳴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 鄭州異開專利事務(wù)所(普通合伙) 41114
• 代理人: 韓鵬程

本發(fā)明公開了一種抗PD?L1單克隆抗體，通過使用PD?L1蛋白免疫小鼠，確定免疫成功后，分離出小鼠脾臟，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，通過PCR擴(kuò)增出抗體輕、重鏈基因，然后構(gòu)建單鏈抗體噬菌體庫，通過篩選獲得目標(biāo)抗體。本發(fā)明從噬菌體抗體庫篩選出的抗PD?L1單克隆抗體對(duì)PD?L1具有良好的親和力，并能夠抑制PD?L1和PD?1的結(jié)合。該抗PD?L1單克隆抗體進(jìn)一步人源化后作為免疫檢查點(diǎn)抑制劑，可用于癌癥及感染性疾病的治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種抗PD-L1單克隆抗體，本發(fā)明還涉及該抗體在制備抗癌藥物方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

癌癥被稱為世界五大絕癥之一，全世界對(duì)癌癥治療的探索從未中斷過，但時(shí)至今日，癌癥治療依舊是世界性難題，給社會(huì)和患者（包括其家庭）造成了巨大的經(jīng)濟(jì)壓力。癌癥病變的基本單位是癌細(xì)胞，無止境增生的癌細(xì)胞使患者體內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗，同時(shí)癌細(xì)胞還能釋放出多種毒素，使人體產(chǎn)生一系列癥狀，如果發(fā)現(xiàn)和治療不及時(shí)，它還可轉(zhuǎn)移到全身各處生長繁殖。傳統(tǒng)治療癌癥的手段包括放化療、手術(shù)等，但治療效果遠(yuǎn)不能令人滿意。近年來興起的免疫治療方法依靠其突出的表現(xiàn)已成為癌癥治療的標(biāo)準(zhǔn)方法，其原理是通過調(diào)控患者的免疫應(yīng)答，以增強(qiáng)自身免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。

免疫治療方法主要集中在三個(gè)方面：一是免疫檢驗(yàn)點(diǎn)的阻斷；二是過繼性細(xì)胞療法；三是癌癥疫苗。免疫檢驗(yàn)點(diǎn)是機(jī)體防止過度激活免疫系統(tǒng)的抑制途徑，對(duì)于維持自身耐受至關(guān)重要。腫瘤細(xì)胞利用某些免疫檢驗(yàn)點(diǎn)避免被 T 細(xì)胞殺傷，

PD-1/PD-L1 是經(jīng)常被利用的檢驗(yàn)點(diǎn)之一，腫瘤細(xì)胞通過表達(dá)PD-L1與T細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合從而避免被腫瘤細(xì)胞識(shí)別和殺傷，因此阻斷 PD-1 和 PD-L1 的結(jié)合對(duì)解除免疫系統(tǒng)的抑制有重要意義。

程序性死亡受體-1 (Programmed Death receptor-1， PD-1) ，由TasukuHonjo及其同事在1992年首次報(bào)道，并提出PD-1與程序性凋亡有關(guān)?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)PD-1是一種跨膜蛋白，參與免疫檢查點(diǎn)，在T細(xì)胞和祖B細(xì)胞表面廣泛表達(dá)。PD-L1（B7-H1，CD274）是PD-1的配體，PD-L1大小為40KD，在多種造血細(xì)胞和非造血細(xì)胞上誘導(dǎo)表達(dá)。PD-1是CD28 / CTLA-4 /ICOS共刺激受體家族成員，可提供對(duì)淋巴細(xì)胞免疫有深遠(yuǎn)影響的負(fù)信號(hào)，調(diào)控免疫應(yīng)答。研究表明，可以通過破壞PD-1和PD-L1之間的結(jié)合來增強(qiáng)T細(xì)胞殺傷能力，使腫瘤部位T細(xì)胞和IFN-γ增加，有利于形成抗腫瘤微環(huán)境。

目前，國外已上市的PD1和PD-L1藥物總共有6種，其中PD-1藥物3種，PD-L1藥物3種。2014年Nivolumab（納武利尤單抗，商品名：Opdivo，歐狄沃）獲批上市，成為第一個(gè)PD-1抑制劑，用來治療晚期黑色素瘤，開啟了此類藥物的飛速發(fā)展時(shí)代。另兩個(gè)PD-1藥物分別為為Pembrolizumab（帕博利珠單抗，商品名：Keytruda，可瑞達(dá)）和Cemiplimab（商品名：Libtayo）。PD-L1藥物有Atezolizumab（阿特珠單抗，商品名：Tecentriq），Duravulumab（商品名：Imfinzi），Avelumab（商品名：Bavencio）。這些藥物被用于治療多種類型的癌癥，包括黑素瘤，非小細(xì)胞肺癌，腎細(xì)胞癌，尿路上皮癌，肝細(xì)胞癌，胃癌，結(jié)腸直腸癌，頭頸癌，Merkel細(xì)胞癌和霍奇金淋巴瘤。Nivolumab和Pembrolizumab也已在我國上市，同時(shí)我國國內(nèi)研發(fā)的特瑞普利單抗（商品名：拓益）和信迪利單抗（商品名：達(dá)伯舒）兩種PD-1抗體，也于同一時(shí)間在國內(nèi)獲批上市，但國內(nèi)暫時(shí)沒有PD-L1抗體藥物上市。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種抗PD-L1單克隆抗體，本發(fā)明還提供該抗體在制備抗癌藥物方面的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案：

本發(fā)明所述的抗PD-L1單克隆抗體，其輕鏈序列和重鏈序列如下：

輕鏈序列：