[發明專利]一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201911287903.1
• 申請日: 2019-12-15
• 公開（公告）號: CN111154834A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 錢靜;朱天明;徐俊俠
• 申請（專利權）人: 金華市強盛生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;C12Q1/28
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒，包括R1試劑和R2試劑，所述R1試劑包括三羥基甲基甲烷緩沖液100?200mmol/L、甘氨酸緩沖液200?260mmol/L、聚羧基乙二醇氨基1.0??5.0g/L、甲酰胺30?50mmol/L、IgG1.5?2g/L、山梨酸20?30mmol/L，辣根過氧化物酶50?70mmol/L、其余為去離子水；所述R2試劑包括L?亮氨酸對硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸緩沖液150?180mmol/L、哌嗪?N,N?二(2?乙磺酸)1?5mmol/L，其余為去離子水；制成一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒及其制備方法，其具有抗干擾能力強，同時具有穩定性高的效果。

技術領域

本發明涉及一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

LAP是一種蛋白酶，肝內含量很豐富。肝內外膽淤時，LAP活力顯著增高，尤其在惡性膽淤時，其活力隨病情進展而持續增高。試劑對肝道梗阻及胰腺癌的診斷有價值。肝壞疽、肝腫瘤、肝炎、乳腺癌、肝癌、膽道癌、胰腺癌、子宮內膜癌、卵巢癌明顯增高。肝硬化、傳染性肝炎可中度增高，常為參考值的2-4倍。阻塞性黃疸明顯增高，常達參考值5倍以上，并出現在膽紅素或ALP 上升之前。

LAP還可以檢測尿液，在一些病例中可以檢測尿液中LAP的變化，而不必采血，亮氨酸氨基肽酶(LAP)LAP在人體各組織中廣泛存在，在毒性物質或疾病影響到富含LAP的近端小管時，尿LAP活性最高。腎小球基底膜通透性增高、腎小管上皮細胞損害、藥物致中毒性腎損害和腎腫瘤時LAP增高。腫瘤治療后尿LAP增高提示腫瘤復發。對各種腎臟病例進行分析，發現LAP陽性率最高。

在亮氨酸氨基肽酶的檢測中，其底物的穩定性至關重要，對其底物酶反應直接關系到實驗所涉及到的準確性和特異性，而市面上所涉及到的底物一般采用L-亮氨酸對硝基苯胺，其穩定性對于試劑要說比較苛刻，因此，特申請一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒及其制備方法來對底物L-亮氨酸對硝基苯胺進行穩定性的控制，用以提高實驗準確性。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種抗干擾能力強，同時具有穩定性高的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒及其制備方法。

為解決上述問題，本發明采用如下技術方案：一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒，包括R1試劑和R2試劑，所述R1試劑包括三羥基甲基甲烷緩沖液 100-200mmol/L、甘氨酸緩沖液200-260mmol/L、聚羧基乙二醇氨基1.0--5.0g/L、甲酰胺30-50mmol/L、IgG 1.5-2g/L、山梨酸20-30mmol/L，辣根過氧化物酶 50-70mmol/L、其余為去離子水；所述R2試劑包括L-亮氨酸對硝基苯胺 15mmol/L、甘氨酸緩沖液150-180mmol/L、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)1-5mmol/L，其余為去離子水。

進一步的方案為：所述R1試劑和R2試劑中甘氨酸緩沖液為25±1°，PH 為6.6的溶液。

進一步的方案為：所述R1試劑和R2試劑體積比為3:1。

進一步的方案為：所述亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒的波長為410nm。

進一步的方案為：所述IgG為驢或兔IgG。

本發明還公開了一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1)、將甘氨酸緩沖液和雙甘肽進行攪拌混合，先靜至10分鐘，靜至時溫度控制在50-60℃，然后加入甲苯酸鈉、枸鹽酸鈉和海藻糖和純凈水，然后再緩慢滴加IgG邊攪拌，滴加的時候溫度控制在25℃-30℃，制得R1試劑；

2)、先把甘氨酸緩沖液和甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺對甲苯磺酸混合，并放入到攪拌器內攪拌20分鐘，去掉上清液后靜置半小時，再把聚乙二醇、明膠以及純凈水進行混合，再把兩者混合液倒入到一起制得R2試劑；