[發(fā)明專利]可結(jié)合CTLA4的多肽及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911280508.0
• 申請(qǐng)日: 2019-12-13
• 公開（公告）號(hào): CN110950957B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳稚偉;吳喜林;施海霞;趙振民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 源道隆（蘇州）醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/13;A61K48/00;A61P31/00;A61P35/00;G01N33/68
• 代理公司: 武漢謙源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42251
• 代理人: 劉川

本發(fā)明涉及一種可結(jié)合CTLA4的多肽，包括3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1?3，CDR1序列為或包括SEQ ID NO:1?8所示序列之一，CDR2序列為或包括SEQ ID NO:9?16所示序列之一，CDR3序列為或包括SEQ ID NO:17?25所示序列之一。本發(fā)明針對(duì)腫瘤患者進(jìn)行納米抗體藥物開發(fā)，通過(guò)制備CTLA4蛋白、免疫小羊駝、利用噬菌體庫(kù)展示納米單抗的平臺(tái)技術(shù)等，篩選到特異性結(jié)合CTLA4的納米抗體VHH，鑒定了其CDR序列。本發(fā)明為腫瘤和傳染病患者臨床治療提供潛在的納米抗體新藥。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域。更特別地，涉及一種可結(jié)合CTLA4的多肽，所述的多肽在制備CTLA4檢測(cè)劑或腫瘤患者治療藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤是指機(jī)體局部組織的細(xì)胞異常增生而形成的一種新生物，常常表現(xiàn)為局部的腫塊。根據(jù)腫瘤的性質(zhì)，一般將其分為良性腫瘤和惡性腫瘤。惡性腫瘤生長(zhǎng)較快，易向周圍組織擴(kuò)散，容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，危及生命。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4(cytotoxicTlymphocyteantigen-4，CTLA-4)是T細(xì)胞表面表達(dá)的一種共刺激分子，與CD28高度同源，具有共同配體B7-1(CD80)和B7-2(CD86)。少量CTLA-4即可有效與CD28競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合配體，削弱CD28與配體的結(jié)構(gòu)和，抑制T細(xì)胞激活的信號(hào)傳遞。

1993年，一種來(lái)源于駱駝科的新型天然抗體被發(fā)現(xiàn)。該抗體天然缺失輕鏈而只由重鏈組成，其重鏈包含兩個(gè)恒定區(qū)(CH2和CH3)、一個(gè)鉸鏈區(qū)和一個(gè)重鏈可變區(qū)(Variableheavy chain domain，VHH，即抗原結(jié)合位點(diǎn))，該重鏈可變區(qū)的相對(duì)分子質(zhì)量約為13KDa，僅為常規(guī)抗體的1/10，且分子高度和直徑均在納米級(jí)別，是目前可獲得的最小的功能性抗體片段，因此又被稱為納米單抗(Nanobody，Nb)。因納米單抗穩(wěn)定性高(90℃條件下仍不會(huì)降解)、親和力高、與人源抗體同源性超過(guò)80％、毒性和免疫原性均較低等特點(diǎn)，最近納米單抗被廣泛用于免疫診斷試劑盒研發(fā)、影像學(xué)研發(fā)以及針對(duì)腫瘤、炎癥、傳染病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病等領(lǐng)域的抗體藥物研發(fā)。

目前已有一些抗CTLA4抗體用于治療黑色素瘤，但是，往往具有嚴(yán)重的副作用，限制了抗CTLA-4的應(yīng)用。因此，需要制備新的抗CTLA-4抗體，為研發(fā)副作用更小的抗腫瘤和抗傳染病的新藥做儲(chǔ)備。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明通過(guò)用抗原免疫小羊駝，獲取駱駝源納米單抗及其VHH，用于診斷和治療高表達(dá)CTLA4的病人。基于這些研究，本發(fā)明提供了一種可結(jié)合CTLA4的多肽，包括3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1-3，CDR1序列為或包括SEQ ID NO:1-8所示序列之一，CDR2序列為或包括SEQ IDNO:9-16所示序列之一，CDR3序列為或包括SEQ ID NO:17-25所示序列之一。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述多肽還包括4個(gè)框架區(qū)FR1-4，所述FR1-4與所述CDR1-3交錯(cuò)排列。框架區(qū)的序列可根據(jù)物種來(lái)設(shè)計(jì)。例如，可將FR1-4序列設(shè)計(jì)為如SEQ IDNO:26-29所示，但本發(fā)明的范圍不限于此，也可將框架區(qū)FR1-4序列人源化為如SEQ ID NO:30-33所示。抗體的特異性識(shí)別和結(jié)合能力主要由CDR區(qū)序列決定，F(xiàn)R序列影響不大，可根據(jù)物種來(lái)設(shè)計(jì)，這是本領(lǐng)域公知的。例如，可設(shè)計(jì)人源、鼠源或羊駝源的FR區(qū)序列來(lái)連接上述CDR，從而得到一個(gè)可結(jié)合人PD1的多肽或結(jié)構(gòu)域。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽為單克隆抗體。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽為VHH。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽為駱駝源的VHH或人源化的VHH。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述多肽的CDR序列如下：

I)CDR2的序列為SEQ ID NO：34，其中，第二位的X表示絲氨酸或蘇氨酸；并且

II)CDR1的序列為SEQ ID NO:1或2；并且CDR3的序列選自SEQ ID NO:17-19。