[發明專利]一種殺蟲基因序列及其應用

在審

• 申請號: 201911279308.3
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN110964734A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 吳華;張敏;張丹;馬志卿;馮俊濤
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/113;A01N57/16;A01P7/04
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 孫雅靜

本發明公開了一種殺蟲基因序列及其應用，所述的基因序列如SEQ ID NO：1所示，或至少包含SEQ ID NO：1所示序列90％的同一性的基因序列；所述的基因序列如SEQ ID NO：1所示，或至少包含SEQ ID NO：1所示序列90％的同一性的基因序列；所述的基因序列如SEQ ID NO：1所示，或至少包含SEQ ID NO：1所示序列90％的同一性的基因序列。通過微量注射的方法導入試蟲體內后發現死亡率分別達到75.6％、71.9％和82.2％，致死作用顯著。此外，本發明獲得的dsRNA片段可通過麥片飼喂的方式作為玉米象害蟲防治的有利手段。

技術領域

發明涉及生物技術領域，具體涉及根據玉米象細胞色素C氧化酶核心亞基Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ設計的基因片段及其合成的一種殺蟲基因序列及其應用。

背景技術

玉米象是分布廣泛、為害嚴重的儲糧害蟲，對多種谷物及加工品，干果、豆類、藥材、油料均造成嚴重危害，尤其以陰暗潮濕的倉庫最為嚴重。在倉儲害蟲防治應用最為廣泛的是溴甲烷和磷化鋁，而溴甲烷在發展中國家已被禁用，磷化鋁產品由于其高毒、高風險，在防除糧食倉儲害蟲時易發生中毒傷亡事故。

RNA干擾(RNAi)技術利用雙鏈RNA高效、特異性降解細胞內同源mRNA從而阻斷靶基因表達，使細胞出現靶基因缺失的表型，是明確昆蟲毒理學基本問題的有力工具，也將成為害蟲治理的有效策略。RNAi于1998年在秀麗隱桿線蟲中首次闡明其作用機制、得到雙鏈RNA(dsRNA)干擾較高效的結論，此后出現了潛在的下一代害蟲管理策略：利用RNAi介導的宿主誘導基因沉默(HIGS)進行害蟲防治，其優點在于因為RNAi的序列特異性適用于單個物種，并可能有針對性地選擇靶標。另外，可以控制昆蟲對化學殺蟲劑和植物毒素的敏感性，降低化學殺蟲劑用量。但篩選出具有序列特異性以及高致死作用的dsRNA是成功實施RNAi防治害蟲的重要前提。

細胞色素C氧化酶(COX)是真核生物線粒體內膜和需氧菌細胞膜電子傳遞鏈上的終端金屬膜蛋白酶，負責細胞色素C到氧分子的電子傳遞功能，是線粒體氧化能力的關鍵調節部位。由三個核心亞基(COXⅠ、Ⅱ、Ⅲ)以及十個小亞基組成。

發明內容

本發明的目的在于提供根據玉米象細胞色素C氧化酶(COX)三個核心亞基(COXⅠ、Ⅱ、Ⅲ)設計的基因片段，其合成的dsRNA在害蟲防治中的作用。

一種殺蟲基因序列，所述的基因序列如SEQ ID NO：1所示，或至少包含SEQ ID NO：1所示序列90％的同一性的基因序列。

可選的，合成所述殺蟲基因序列的引物包括SEQ ID NO：2所示的上游引物和SEQID NO：3所示的下游引物。

可選的，所述的殺蟲基因序列根據NCBI數據庫中玉米象細胞色素C氧化酶核心亞基Ⅰ基因(NCBI參考序列：NC_030764.1:1323-2864)設計的基因片段。

一種殺蟲基因序列，所述的基因序列如SEQ ID NO：4所示，或至少包含SEQ ID NO：4所示序列90％的同一性的基因序列。

可選的，合成所述殺蟲基因序列的引物包括SEQ ID NO：5所示的上游引物和SEQID NO：6所示的下游引物。

可選的，所述的殺蟲基因序列根據NCBI數據庫中玉米象細胞色素C氧化酶核心亞基Ⅱ基因(GENBANK登錄號：KX783028)設計的基因片段。

一種殺蟲基因序列，所述的基因序列如SEQ ID NO：7所示，或或至少包含SEQ IDNO：7所示序列90％的同一性的基因序列。

可選的，合成所述殺蟲基因序列的引物包括SEQ ID NO：8所示的上游引物和SEQID NO：9所示的下游引物。