[發明專利]一種基于乙二醛酶活力篩選耐鹽萱草品種的方法

在審

• 申請號: 201911279108.8
• 申請日: 2019-12-11
• 公開（公告）號: CN110954492A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 倪迪安;梁錦;鐘榮;譚雨馨;吳寒;楊華英
• 申請（專利權）人: 上海應用技術大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種基于乙二醛酶活力篩選耐鹽萱草品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取萱草幼嫩葉片，將其置于液氮下粉碎成細粉，加入磷酸緩沖液，振蕩搖勻后，再在低溫下離心，然后，取上清液，分出兩等份，一份用于測定蛋白質含量，另一份用于測定乙二醛酶活力；

(2)所述的測定蛋白質含量的方法：考馬斯亮藍法；

(3)所述的測定乙二醛酶活力的方法：向該份上清液中加入蒸餾水、磷酸緩沖液、硫酸鎂、還原型谷胱甘肽和甲基乙二醛，混勻后，用分光光度計讀取吸光度的變化，根據每分鐘底物甲基乙二醛的消耗量和蛋白質含量計算乙二醛酶的活力，乙二醛酶活力高的植株即為耐鹽。

2.根據權利要求1所述的篩選耐鹽萱草品種的方法，其特征在于，還包括評價植株的存活能力及生長發育狀況，將測得乙二醛酶活力高的萱草植株置于高濃度氯化鈉基質處理，觀察其表型。

3.根據權利要求1或2所述的篩選耐鹽萱草品種的方法，其特征在于，步驟(1)的磷酸緩沖液還含有苯甲基磺酰氯和聚乙烯吡咯烷酮。

4.根據權利要求3所述的篩選耐鹽萱草品種的方法，其特征在于，磷酸的濃度為0.1mol/L，pH為7.2，苯甲基磺酰氟的濃度為1mmol/L，聚乙烯吡咯烷酮的質量體積比濃度為1％。

5.根據權利要求1或2所述的篩選耐鹽萱草品種的方法，其特征在于，步驟(2)的硫酸鎂的濃度為15mmol·L^-1，谷胱甘肽的濃度為1.7mmol·L^-1，甲基乙二醛的濃度為3.5mmol·L-1。

6.根據權利要求1或2所述的篩選耐鹽萱草品種的方法，其特征在于，步驟(2)中在240nm處讀取吸光度每分鐘的變化，并且使用3.37mM^-1·cm^-1的消光系數計算活力。