[發明專利]一種金-姜黃素納米粒子猝滅CdS雜化TiO2

有效

• 申請號: 201911272160.0
• 申請日: 2019-12-12
• 公開（公告）號: CN110907511B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 杜宇;李小建;任祥;孫曉君;魏琴;楊興龍;王雪瑩;吳丹;馬洪敏;王歡
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 于洪偉

1.一種金-姜黃素納米粒子猝滅CdS雜化TiO₂納米帶檢測胰島素的電化學發光傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟如下：

（1）使用拋光粉預處理直徑4 mm的玻碳電極，超純水沖洗干凈；

（2）將6 μL 5～10 mg/mL CdS@TiO₂的殼聚糖溶液滴涂到裸玻碳電極表面，室溫保存至干燥；

（3）滴涂5 μL 500 μg/mL一抗溶液于步驟（2）制備得到的玻碳電極表面，4 ℃冰箱中保存至干燥，超純水清洗；

（4）滴涂3 μL質量分數為1%的牛血清白蛋白，封閉非特異性活性位點，4 ℃冰箱中保存至干燥，超純水清洗；

（5）將6 μL不同濃度的胰島素滴涂在電極表面，4 ℃冰箱中保存至干燥，超純水清洗；

（6）將5 μL 1～5 mg/mL二抗-金-姜黃素/ZIF-8溶液滴涂在電極表面，4 ℃冰箱中保存至干燥，超純水清洗，即制得檢測胰島素的電化學發光生物傳感器；

所述二抗-金-姜黃素/ZIF-8溶液，制備步驟如下：

（a）金-姜黃素納米粒子的制備

首先將8 mg姜黃素分散到5 mL二甲基亞砜中，形成透明均一的溶液；然后，將2 mL姜黃素-二甲基亞砜溶液加入到45 mL超純水中，100 ℃回流攪拌；加入100 μL 0.1 M NaOH，當溶液加熱至100 ℃，加入1 mL 2% HAuCl₄溶液，攪拌1 h，冷卻至室溫，使用12 kDa的透析袋透析，去除未反應的雜質和小粒子，得到金-姜黃素溶液；

（b）金-姜黃素/ZIF-8納米花的制備

將1 mL 2-甲基咪唑與2～5 mL金-姜黃素溶液混合，攪拌10 min；之后分別加入1 mL20 mM乙酸鋅溶液和0.05 g牛血清白蛋白，攪拌4 h；最后，將得到的金-姜黃素/ZIF-8納米花離心、洗滌，真空干燥；

（c）二抗-金-姜黃素/ZIF-8溶液的制備

通過1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺活化ZIF-8表面的羧基與二抗表面的氨基反應，將抗體固定在金-姜黃素/ZIF-8的表面；將2 mg金-姜黃素/ZIF-8分散在1 mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液中，超聲30 min；然后，加入500 μL 100 mM1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和500 μL 400 mM N-羥基琥珀酰亞胺，攪拌1h；再將500 μL 500 μg/mL二抗溶液加入到上述溶液中，4 ℃攪拌6 h；最后，加入100 μL 1%BSA封閉非特異性位點，離心得到二抗-金-姜黃素/ZIF-8，將其分散在1 mL pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，保存在4 ℃冰箱中待用。

2.如權利要求1所述的一種金-姜黃素納米粒子猝滅CdS雜化TiO₂納米帶檢測胰島素的電化學發光傳感器的制備方法，其特征在于，CdS@TiO₂納米帶的制備步驟如下：

將0.1 g乙酸鎘分散在30 mL超純水中，加入25～50 mg二氧化鈦納米帶，超聲1 h；然后，加入5 mL 5 M Na₂S溶液，攪拌12 h，將上述溶液轉移至100 mL反應釜中，160 ℃反應16h，離心、洗滌、干燥得到CdS@TiO₂納米帶。

3.如權利要求1所述的制備方法制備的一種金-姜黃素納米粒子猝滅CdS雜化TiO₂納米帶檢測胰島素的電化學發光傳感器的應用，其特征在于，該電化學發光傳感器應用于對胰島素的檢測，檢測步驟如下：

（1）將參比電極-Ag/AgCl電極、對電極-鉑電極、所制得的電化學發光傳感器作為工作電極，連接在化學發光檢測儀的暗盒中，將電化學工作站和化學發光檢測儀連接在一起，光電倍增管的高壓設置為800 V，掃描電壓設置為0～-1.6 V，掃速設置為0.15 V/s；

（2）使用含1～8 mmol/L過氧化氫、20～120 mM過硫酸鉀的磷酸鹽緩沖溶液，通過電化學發光法檢測不同濃度的胰島素產生的電化學發光信號強度；

所述磷酸鹽緩沖溶液，其pH=5.0～8.5，是用1/15 mol/L Na₂HPO₄和1/15 mol/L KH₂PO₄配制；

（3）根據所得的電化學發光強度值與胰島素濃度對數的線性關系，繪制工作曲線。