[發明專利]識別細極鏈格孢菌的單克隆抗體及其雜交瘤細胞株AtH9

有效

• 申請號: 201911260571.8
• 申請日: 2019-12-10
• 公開（公告）號: CN110922479B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 黃唯一;趙偉春;溫思思;徐云飛
• 申請（專利權）人: 浙江中醫藥大學
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C12N5/20
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 邱啟旺

本發明公開了一種識別細極鏈格孢菌Alternaria tenuissima的單克隆抗體及其雜交瘤細胞株，所述識別細極鏈格孢菌的單克隆抗體，由保藏編號為：CCTCC No：C2019230的雜交瘤細胞株分泌產生；所述雜交瘤細胞株命名為雜交瘤細胞株AtH9，于2019年10月17日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏編號為：CCTCC No：C2019230。該單克隆抗體被用于由細極鏈格孢菌侵染引發的動植物病害的鑒定、動態監測以及細極鏈格孢菌的生物學研究，通過BaL b/c小鼠腹腔注射該細胞株，即可獲得大量的該單克隆抗體，與多克隆抗體相比，具有純度高，專一性強，重復性好等優點。

技術領域

本發明屬于動物領域，特別涉及一種識別細極鏈格孢菌的單克隆抗體及其雜交瘤細胞株AtH9。

背景技術

半知菌亞門鏈格孢屬真菌細極鏈格孢菌Alternaria tenuissima是貝母黑斑病的病原真菌之一。病菌以菌絲隨病殘組織遺落在土中越冬，第二年再次侵染貝母。細極鏈格孢菌也是眾多農作物的黑斑病的致病菌，每年給農業生產造成嚴重損失。而鏈格孢屬真菌種類繁多，近緣種的菌落、菌絲和孢子形態相似，難以依靠上述特征加以區分。本發明公開的針對細極鏈格孢菌的單克隆抗體(單抗)結合酶聯免疫吸附試驗(ELISA)由于具有靈敏度高、特異性強、適于大量檢測田間細極鏈格孢菌的特點，為應用該抗體進行細極鏈格孢菌的鑒定和生物學研究，由細極鏈格孢菌感染的病害如浙貝母黑斑病等的發生動態監測奠定基礎。

發明內容

本發明提供了一種識別細極鏈格孢菌的單抗，由保藏編號為：CCTCC No：C2019230的雜交瘤細胞株分泌產生。

本發明還提供了一種雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株命名為雜交瘤細胞株AtH9，于2019年10月17日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，中國武漢市武漢大學，保藏編號為：CCTCC No：C2019230。

本發明具有如下有益效果：

(1)單抗的特異性強：該單抗與細極鏈格孢菌抗原反應強，且不與鏈格孢菌、尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌、木賊鐮刀菌、半裸鐮刀菌、灰葡萄孢菌、莖點霉菌、擬莖點霉菌的抗原發生反應，可用于細極鏈格孢菌及其引發的浙貝母黑斑病的檢測。

(2)單抗的檢測靈敏度高：采用間接ELISA檢測結果表明，該單抗對細極鏈格孢菌菌絲及孢子制備的抗原的檢測靈敏度為12.21ng/mL(即每孔1.221ng)，具有良好的開發應用前景。

(3)單抗的類型為IgM。

(4)單抗結合的目標蛋白單一：該單抗體僅與細極鏈格孢菌約50kDa的抗原蛋白結合。

(5)浙貝母提取液對單抗的檢測靈敏度無影響：該單抗對浙貝母蛋白提取液無存在交叉反應；在細極鏈格孢菌菌絲及孢子制備的抗原中加入浙貝母蛋白提取液后，浙貝母提取液對單抗的檢測靈敏度無影響，為12.21ng/mL(即每孔1.221ng)，具有良好的開發應用前景。

附圖說明

圖1 AtH9的效價檢測；

圖2 AtH9與不同真菌抗原的反應；

圖3 AtH9的檢測靈敏度測定；

圖4 AtH9的類型及亞類鑒定；

圖5 AtH9結合的目標蛋白檢測；

圖6 浙貝母提取液對AtH9的檢測靈敏度的影響。

具體實施方式

以下結合附圖和實施實例進一步解釋本發明。

實施例1：雜交瘤細胞株制備