[發明專利]能夠特異性結合MPO的結合蛋白、其用途、試劑、試劑盒和檢測MPO的方法

有效

• 申請號: 201911260209.0
• 申請日: 2019-12-10
• 公開（公告）號: CN112940130B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 崔鵬;何志強;孟媛;鐘冬梅;張明明;覃婷;王晨
• 申請（專利權）人: 菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;G01N33/577;G01N33/573
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發明公開了一種能夠特異性結合MPO的結合蛋白、其用途、試劑、試劑盒和檢測MPO的方法，涉及抗體技術領域，本發明公開的結合蛋白包括抗原結合結構域，所述抗原結合結構域包括如下互補決定區中的至少一個：CDR?VH1、CDR?VH2、CDR?VH3、CDR?VL1、CDR?VL2和CDR?VL3。本發明提供的結合蛋白可以特異性結合MPO，具有較好的結合活性和親和力，可用于MPO的檢測，提高檢測特異性和靈敏度。

技術領域

本發明涉及抗體技術領域，具體而言，涉及一種能夠特異性結合MPO的結合蛋白、其用途、試劑、試劑盒和檢測MPO的方法。

背景技術

髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)是由中性粒細胞、單核細胞和某些巨噬細胞分泌的一種含血紅素輔基的血紅素蛋白酶，是血紅素過氧化物酶超家族成員之一。相對分子質量為150KD，由2個亞單位通過二硫鍵聚合而成，每個亞單位又由一條重鏈和一條輕鏈組成。純化的人MPO活性為25～351U/mg，水溶性好，反應最適pH為4.5～5.5， pH≥10或≤2時，失活。MPO在髓系細胞中以MPOⅠ、Ⅱ和Ⅲ3種亞型存在。這3種亞型的重鏈有所差異，功能上的差異尚不明確，有待繼續研究。

MPO是中性粒細胞的功能標志和激活標志。MPO在宿主對抗微生物入侵早期免疫系統激活機制中起重要作用。其不僅能在吞噬細胞內殺滅微生物，而且可釋放到細胞外，破壞多種靶物質，如腫瘤細胞、血小板、NK細胞、原蟲和毒素等，其還對機體產生和調節炎癥反應等方面發揮作用。在中心粒細胞活化后被釋放出來，MPO形成多種氧自由基形式，氧化低密度脂蛋白和降低NO的生物利用度來促進動脈粥樣硬化斑塊形成。因此，循環中MPO水平升高可能預示炎癥的發生。

冠心病是心血管系統中常見的疾病，而動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是形成冠心病的重要基礎。MPO通過產生自由基和多種反應性物質，促進斑塊形成和不穩定性增加，加速AS病變形成，進而引發并發癥如急性冠脈綜合征(Acute Coronary Syndrome，ACS)。在急性冠脈綜合征復雜的病理生理過程中，炎癥相關生物標志物中超敏C反應蛋白(Hypersensitive C-reactive protein，Hs-CRP)是最具代表性的指標，然而，Hs-CRP在其他因素導致的感染、炎癥中也會升高，診斷特異性差，容易出現誤診。

目前，心肌損傷標志物肌鈣蛋白Ⅰ(Cardiac TroponinⅠ，cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及纖維蛋白原(Fibrinogen，Fib)等是臨床常用來評價病情的指標。相對于肌cTnⅠ、CK-MB及Hs-CRP在患者出現癥狀后開始升高，而MPO在冠狀動脈炎癥反應和心臟時間發生前即可對ACS做出評估的生物學標志物。

MPO對ACS的診斷尤其是對急性心肌梗死的診斷具有一定價值。大量的研究表明：急性心梗患者的血漿MPO的表達顯著高于不穩定心絞痛患者和正常人，而MPO缺陷的個體，罹患心血管疾病的危險性明顯下降。血清MPO水平與冠脈病變嚴重程度呈正相關，反映冠脈炎癥活動性狀況。因此，MPO水平的升高不僅與患冠狀動脈疾病易感性相關，還可以預測早期患心肌梗死的危險性。

有試驗證實：MPO在ACS中的早期診斷價值，在患者出現癥狀1h內既有診斷價值，而此時cTnⅠ、CK-MB還處于基線水平。MPO可作為一種新的預測ACS的炎癥標志物，能識別cTnⅠ陰性的ACS患者未來發生不良心血管事件的危險性。最近的研究證實，MPO結合超敏C反應蛋白檢測大大提高了對冠脈驗證反應和遠期預后的診斷價值。此外，MPO對于心肌重構有一定作用，因此它也可能是潛在的心衰標志物。

MPO可作為冠心病的預測因子和急性冠脈綜合征預后判斷指標：MPO升高提示患者存在冠狀動脈炎癥、斑塊不穩定，所以MPO可早期識別不穩定斑塊，是ACS早期診斷的炎癥標記物之一。