[發明專利]一種微通道內構筑生物功能化的氟代氫氧化鋅/氧化鋅復合納米林陣列的方法

在審

• 申請號: 201911258802.1
• 申請日: 2019-12-10
• 公開（公告）號: CN111019900A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 李耀剛;武志華;段友容;趙德;王宏志;張青紅;侯成義
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12M1/00;G01N33/569;G01N33/574;B01L3/00
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達;魏峯

1.一種微通道內構筑生物功能化的氟代氫氧化鋅/氧化鋅復合納米林陣列的方法，包括：

(1)將玻璃毛細管用高錳酸鉀溶液活化，得到已活化的微通道，將鋅鹽和氟鹽的混合液與六亞甲基四胺溶液以相同的速度同時連續通入已活化的微通道內反應，處理，再同時連續通入鋅鹽溶液與六亞甲基四胺溶液繼續反應，沖洗，烘干，得到內表面構筑有氟代氫氧化鋅/氧化鋅復合納米林陣列的微通道；

(2)將第一硅烷偶聯劑溶液通入步驟(1)中內表面構筑有氟代氫氧化鋅/氧化鋅復合納米林陣列的微通道內，第一次孵育，沖洗，固化，再通入第二硅烷偶聯劑溶液，第二次孵育，沖洗，然后通入N-馬來酰亞胺丁酰氧基琥珀酰亞胺酯溶液第三次孵育，沖洗，再通入鏈霉親和素溶液第四次孵育，沖洗，通入生物素化抗體第五次孵育，沖洗，得到生物功能化的氟代氫氧化鋅/氧化鋅復合納米林陣列的微通道。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中將玻璃毛細管用高錳酸鉀溶液活化為：將玻璃毛細管浸入高錳酸鉀溶液中，在70～100℃下停留30～90min，其中高錳酸鉀溶液的濃度為0.1～50mM。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中鋅鹽包括硝酸鋅、硫酸鋅或乙酸鋅；氟鹽包括氟化銨或氟化鈉；鋅鹽和氟鹽的混合液中鋅鹽的濃度為0.01-1M，氟鹽的濃度為0.01～1M，鋅離子與氟離子的摩爾比為2:1～1:3；六亞甲基四胺溶液濃度為0.005-1M。

4.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中將鋅鹽和氟鹽的混合液與六亞甲基四胺溶液以相同的速度同時連續通入已活化的微通道內反應為：將鋅鹽和氟鹽的混合液與六亞甲基四胺溶液以相同的速度同時連續通入已活化的微通道內，先在290～350℃下反應1～2min，然后在70～90℃下反應1～2h，或者直接在70～90℃下反應1～2h。

5.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中處理溫度為150～300℃，處理時間為30～60min；通入速度均為25～150μL/min；繼續反應時間為30～120min。

6.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(2)中第一硅烷偶聯劑溶液和第二硅烷偶聯劑溶液濃度為1～10％v/v；第一硅烷偶聯劑為3-氨丙基三乙氧基硅烷；第二硅烷偶聯劑為3-巰基丙基三甲氧基硅烷；N-馬來酰亞胺丁酰氧基琥珀酰亞胺酯溶液濃度為0.25～1mM；鏈霉親和素溶液濃度為5～20μg/mL；生物素化抗體濃度為2.5～20μg/mL。

7.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(2)中第一次孵育為：室溫孵育1～3h，然后50～60℃孵育0.5～1h；第二次孵育溫度為室溫，時間為6～10h；第三次孵育、第四次孵育和第五次孵育溫度均為室溫，時間均為20～60min。

8.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(2)中生物素化抗體包括：抗表皮生長因子受體anti-EGFR、抗上皮細胞粘附分子anti-EpCAM或抗細胞程序性死亡-配體1anti-PD-L1。

9.一種如權利要求1所述方法制備得到的生物功能化的氟代氫氧化鋅/氧化鋅復合納米林陣列的微通道。

10.一種如權利要求1所述方法制備得到的生物功能化的氟代氫氧化鋅/氧化鋅復合納米林陣列的微通道在制備循環腫瘤細胞檢測材料中的應用。