[發明專利]一種果實高固形物含量的番茄材料的制備方法

在審

• 申請號: 201911253432.2
• 申請日: 2019-12-09
• 公開（公告）號: CN110878324A
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發明（設計）人: 李寧;王柏柯;王娟;余慶輝;黃少勇;戴麒
• 申請（專利權）人: 新疆農業科學院園藝作物研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/113;A01H1/02;A01H5/08;A01H6/82;C12Q1/6895
• 代理公司: 烏魯木齊博亞思知識產權代理事務所(普通合伙) 65110
• 代理人: 王志剛

1.一種果實高固形物含量的番茄材料的制備方法，其中INVINH1基因第1外顯子的核苷酸如SEQ ID NO.1所示。

2.如權利要求1所述的INVINH1基因第1外顯子，其特異性靶向sgRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.含有權利要求2所述sgRNA序列的CRISPR/Cas9載體。

4.如權利要求3所述的CRISPR/Cas9載體在制備果實高固形物含量番茄材料中的應用。

5.如權利要求3所述的CRISPR/Cas9載體在番茄改良育種中的應用。

6.一種果實高固形物含量番茄材料的制備方法，包括以下步驟：

（1）利用農桿菌侵染法將權利要求3所述的CRISPR/Cas9載體轉化到低固形物番茄中，獲得T0代轉基因植株；

（2）將T0代植株自交獲得T1代植株；

（3）從T1代中篩選不含有外源轉基因成份，但INVINH1基因發生純合突變且果實固形物含量顯著提高的植株，即高固形物番茄材料。

7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的低固形物番茄為果實固形物含量低的純合自交系材料，市售可得。

8.一種檢測權利要求6所述的制備方法獲得的高固形物番茄生物材料中INVINH1是否成功進行了基因編輯的檢測方法，其特征在于：

首先，設計特異性引物對，如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

然后，利用PCR擴增INVINH1基因的特異片段如SEQ ID NO.5所示，對PCR產物進行測序；

最后，將測序結果與野生型INVINH1基因進行序列比對，檢測在sgRNA的位置是否有堿基突變，如果有堿基突變，意味著成功對INVINH1進行了編輯。