[發明專利]一種胰島囊泡富集裝置及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201911249929.7
• 申請日: 2019-12-09
• 公開（公告）號: CN112940910B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 秦建華;郭雅瓊;鄧鵬偉
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12M1/04
• 分類號: C12M1/04;C12M1/12;C12M1/00;C12N5/071;B23K26/00
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

本發明涉及一種胰島囊泡富集裝置及其制備方法和應用，適用于與原代胰島細胞以及胰島細胞系中囊泡的富集與研究。所述裝置由兩層亞克力結構、兩層密封軟墊及兩片不同孔徑的濾膜組成，該裝置由機械方式固定組裝。本裝置采用物理方法從以尺寸為標準去除雜質、富集胰島囊泡，確保胰島囊泡的純度。本裝置制作簡便，操作簡單，可以有效富集胰島囊泡用于后續研究。

技術領域

本發明涉及胰島囊泡富集裝置的制備方法，屬微機械加工技術領域。

背景技術

胰島素是血糖穩態的關鍵調節因子之一，而胰島素分泌異常被認為是糖尿病發展的重要因素。超過99％的胰島素是由胰腺β細胞分泌的。在每個β細胞內，胰島素存儲在稱為胰島素分泌顆粒(ISG)的特定細胞器中，并通過調節的分泌途徑釋放。當血糖水平升高時，ISG與質膜融合并釋放胰島素。胰島素分泌是一個復雜而有組織的動態過程，包括未成熟ISG(iISG)從高爾基體網絡出芽，成熟ISG(mISG)與細胞膜融合等過程。然而，由于對ISG相關過程(包括生物發生，成熟，轉運和胞吐作用)中涉及的蛋白質缺乏足夠的了解，參與這一過程的分子機制在很大程度上是未知的。因此，在確定iISGs和mISGs的特性和蛋白質含量之前，對它們進行分離和富集是非常重要的。

細胞器蛋白質組圖譜通常通過亞細胞分級分離方法獲得，例如密度梯度離心等，然而經過離心處理得到的囊泡仍然含有很多雜質，對后續研究產生不利影響，迫切需要一種方法來得到純度更高的胰島囊泡。

本發明設計并制作了一種胰島囊泡富集裝置，該裝置為多層結構，包括兩個通道層、兩個密封層和過濾層。利用該裝置，可以從初步離心處理之后得到的混合物中有效富集胰島囊泡，以用于后續研究。

發明內容

本發明的目的在于提供一種胰島囊泡富集裝置。

一種胰島囊泡富集裝置，該裝置有多層結構，由上而下依次為上層通道、密封軟墊a、多孔濾膜層、密封軟墊b、下層通道；所述多孔濾膜層包括兩片多孔膜；上述各層結構之間通過機械方式固定；

其中，上層通道上設有細胞裂解液入口、細胞裂解液出口、囊泡收集入口、囊泡收集出口；下層通道上設有囊泡收集對應入口、富集通道、囊泡收集對應出口；所述上層通道的細胞裂解液入口和細胞裂解液出口通過多孔濾膜與下層通道的細胞裂解液對應結構相通。

所述上層通道和下層通道材料為亞克力或其他硬材質。

上下層通道采用硅膠或其他材質軟墊密封。

針對囊泡的大小采用不同孔徑的多孔膜對囊泡富集。

所述多孔濾膜材質為聚碳酸酯或其他材質。

所述多孔濾膜孔徑其中一片為150-250um，另外一片為350-450um。

該裝置通過螺絲釘或夾具固定。

本發明提供的胰島囊泡富集裝置用于胰島囊泡的富集與純化。

本發明公開了一種胰島囊泡富集裝置的制備方法，具體如下：

(1)裝置通道層的制備：首先進行圖形的設計與繪制，然后利用激光加工技術進行通道層的加工，得到上層通道和下層通道；

(2)密封軟墊的制備：對兩層密封軟墊進行鏤空設計；

(3)準備多孔濾膜，濾膜直徑大于上層空腔3mm以上；

(4)將通道層、密封軟墊、濾膜進行組裝，邊緣用螺絲釘固定得到胰島囊泡富集裝置。

本發明具體采用以下技術方案：

裝置通道層的制備。