[發明專利]DNA純化方法、基因組DNA的提取方法、測序方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201911242355.0
• 申請日: 2019-12-06
• 公開（公告）號: CN112921028A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 唐沖;陳智超;阮鳳英;郭梅;楊林峰
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因科技服務有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6869
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 張立

1.一種DNA純化方法，其特征在于，包括：

(1)利用氨基磁珠對含有DNA的樣本進行第一純化處理，以便獲得第一純化產物；

(2)利用羧基磁珠對所述第一純化產物進行第二純化處理，以便獲得第二純化產物。

2.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟(1)進一步包括：

(1-1)在低濃度鹽溶液條件下，利用氨基磁珠對所述含有DNA的樣本進行第一吸附處理，以便獲得第一吸附產物；

(1-2)在高濃度鹽溶液條件下，對所述第一吸附產物進行第一洗脫處理，以便獲得所述第一純化產物；

所述高濃度鹽溶液的鹽濃度高于所述低濃度鹽溶液的鹽濃度。

3.根據權利要求2所述的純化方法，其特征在于，所述高濃度鹽溶液的使用濃度至少為1M，優選為2M；

任選地，所述低濃度鹽溶液的使用濃度不超過0.2M；

任選地，所述高濃度鹽溶液為氯化鈉溶液。

4.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟(2)進一步包括：

(2-1)利用羧基磁珠對所述第一純化產物進行第二吸附處理，以便獲得第二吸附產物；

(2-2)利用醇溶液對所述第二吸附產物進行第二洗脫處理，以便獲得所述第二純化產物；

任選地，所述醇溶液的體積濃度為70％～90％，所述醇溶液優選為體積濃度70％～80％的乙醇溶液。

5.一種基因組DNA的提取方法，其特征在于，包括：

(a)將樣本和裂解液、蛋白酶和核糖核酸酶混合，反應，分離獲得含有DNA的上清液；

(b)利用氨基磁珠對所述含有DNA的上清液進行第一純化處理，以便獲得第一純化產物；

(c)利用羧基磁珠對所述第一純化產物進行第二純化處理，以便獲得第二純化產物。

6.根據權利要求5所述的提取方法，其特征在于，步驟(a)中所述裂解液包括聚乙烯吡咯烷酮，焦亞硫酸鈉，氯化鈉，三羥甲基氨基甲烷，EDTA和吐溫20；

任選地，所述裂解液包括質量濃度為1％～3％的聚乙烯吡咯烷酮，質量濃度為1％～3％的焦亞硫酸鈉，0.1～0.5M的氯化鈉，80～300mM的三羥甲基氨基甲烷，30～200mM的EDTA和體積濃度為1％～5％的吐溫20；

任選地，所述蛋白酶為蛋白酶K，所述核糖核酸酶為核糖核酸酶A；

任選地，在50～65攝氏度下進行所述反應，所述反應時間為1～3小時。

7.根據權利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述樣本為植物樣本；

任選地，所述第二純化產物中基因組DNA的OD260/280在1.85以上，所述第二純化產物中基因組DNA的OD260/230在1.95以上。

8.根據權利要求5所述的提取方法，其特征在于，步驟(b)進一步包括：

(b-1)在低濃度鹽溶液條件下，利用氨基磁珠對所述含有DNA的上清液進行第一吸附處理，以便獲得第一吸附產物；

(b-2)在高濃度鹽溶液條件下，對所述第一吸附產物進行第一洗脫處理，以便獲得第一純化產物；

所述高濃度鹽溶液的鹽濃度高于所述低濃度鹽溶液的鹽濃度；

任選地，所述高濃度鹽溶液的使用濃度至少為1M，優選為2M；

任選地，所述低濃度鹽溶液的使用濃度不超過0.2M，優選不超過0.1M；

任選地，所述高濃度鹽溶液為氯化鈉溶液；

任選地，步驟(b-1)包括：將所述含有DNA的上清液和PBS緩沖液等體積混合，利用氨基磁珠進行所述第一吸附處理，以便獲得第一吸附產物；

任選地，步驟(c)進一步包括：

(c-1)利用羧基磁珠對所述第一純化產物進行第二吸附處理，以便獲得第二吸附產物；

(c-2)利用醇溶液對所述第二吸附產物進行第二洗脫處理，以便獲得所述第二純化產物；

任選地，所述醇溶液的體積濃度為70％～90％，所述醇溶液優選為體積濃度70％～80％的乙醇溶液。